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Molecular Design of Streptavidin Mutant with specificity for artificial biotin derivatives

具有人工生物素衍生物特异性的链霉亲和素突变体的分子设计

基本信息

批准号：
18F18765
负责人：
井上豪
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-11-09 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ビオチン-ストレプトアビジンは生物界で最も結合定数の高い組み合わせであり、この組み合わせを用いたStrep-tagとして知られている蛋白質の発現・精製システムが開発されている。８つのアミノ酸からなるタグペプチドを認識するストレプトアビジンを担持したビーズで目的タンパク質を高純度に精製することができるシステムである。しかし、生体内にはビオチンがビタミンとして存在しており、ビタミンが存在する系では精製システムも不活化され、ビーズに担持したストレプトアビジンが機能を失うケースが想定される。そこで本研究では天然型ビオチンに干渉されない新規なタグ精製システムの構築を目指した。これまでに我々はストレプトアビジンの活性部位の４カ所に変異を加えると天然型ビオチンに全く結合せず、非天然型ビオチンにのみ結合する変異型ストレプトアビジンの作製に成功していたが、そのノウハウを生かし、まず8つのアミノ酸からなるタグペプチドとD27G/L110E、D27G/S112Y、D27G/S112Fの変異体との複合体のⅩ線構造解析を試み、それぞれ1.30、1.43、1.40Å分解能の精度で解析した。ペプチドとの間の結合定数は、4.51×10-7M (S27G), 4.15×10-6 M (S27G/L110E), 2.45×10-6 M（S27G/S112Y）, 1.31×10-6M (V2112 D27A）となり、野生型Wild SAの値6.91×10-7Mの値とほぼ変わらなかった。得られた構造を基にさらに構造機能相関を検討し、１つの変異体で天然型ビオチンには結合せず、タグペプチドにのみ結合する変異体ストレプトアビジンを作製することに成功した。これによってビタミンとして存在するビオチンに阻害されない新規なタグ精製システムを構築することができた。

The most important information in the biological community is determined by the combination of high-level and high-level data. The results show that the Strep-tag is used to detect the protein content in the biological system. 8. I don't know what to do. I don't know. I don't know. In vivo, in vivo and in vivo. The purpose of this study is to study the nature of the disease and the results of this study. We were told that the active parts of the plant were not affected by the combination of natural and non-natural drugs, while those of the active parts were not fully combined with those of the active parts of the body. I was told that they were successful and that they were not safe from the active parts of the body. D27G/L110E, D27G/S112Y, D27G/S112Y The structural analysis of the D27G/S112F complex X. the precision of the decomposition of the complex is 1.30,1.43,1.40. The combination of fixed numbers, 4.51 × 10-7m (S27G), 4.15 × 10-6m (S27G/L110E), 2.45 × 10-6m (S27G/S112Y), 1.31 × 10-6m (V2112 D27A), wild type Wild SA 6.91 × 10-7m. It is obtained that the basic equipment machine can be used in combination with each other, and the system can be successfully operated by the combination of the two parts of the machine. There is something wrong with the new rules and regulations.