異物排出トランスポーター群の上皮細胞アピカル膜局在を制御する分子シグナル

控制异物流出转运蛋白上皮细胞顶膜定位的分子信号

• 批准号: 16048210
• 负责人: 加藤 将夫
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16048210/
• 关键词: アピカル膜; トランスポーター; PDZタンパク質; 物質輸送; 異物排除; 尿細管再吸収; タンパク質間相互作用; 極性細胞

腎臓や小腸は外界からの低分子異物の侵入を防ぎ、かつそれらを生体から排除する一方、生体に必要な栄養物質を吸収している。これら臓器の上皮細胞アピカル側膜上には、異物を排出し栄養物質を吸収する巧妙な分子メカニズムとして薬物トランスポーター群が存在する。本研究は、異物解毒と栄養吸収という双方向のベクトル輸送を司る高次の分子機構の解明を目指し、薬物トランスポーター分子内に存在する共通の分子配列を同定するとともに、その配列を認識しトランスポーターの機能を制御するアダプタータンパク質の同定を目的とした。Yeast two hybrid法および遺伝子組換え精製タンパク質を用いたpull-down法により、solute carrier superfamilyに属する薬物トランスポーター20種類のC末端と、腎臓および小腸に発現する4つのPDZドメインを有するタンパク質との相互作用を解析した結果、アピカル膜に発現する数種類のトランスポーターとの特異的相互作用を見いだした。このうち腎アピカル膜に局在するPDZタンパク質であるPDZK1存在下で、ペプチドトランスポーターPEPT2および有機カチオン/カルニチントランスポーターOCTN2の基質輸送能の亢進が認められた。特にOCTN2による基質輸送能に及ぼす促進効果は顕著であり、基質に対する親和性の変化ではなく輸送キャパシティーの約6倍の上昇により説明できた。また細胞表面に発現するOCTN2をビオチン標識とWestern blot法により定量したところ、PDZK1はOCTN2の形質膜上での発現量には影響を与えておらず、相互作用により直接輸送を制御することが示唆された。免疫共染色によりPDZK1とOCTN2は腎尿細管刷子縁膜に共局在することが示された。以上の知見は、薬物トランスポーターがアピカル膜において個々に単独で存在するのではなく、PDZタンパクを介したクラスターを形成することにより異物の排除と栄養物の吸収を担っていることを強く示唆するものである。

Renal viscera や small intestine は outside か ら の low molecular eyewinker の intrusion を ぎ, か つ そ れ ら を raw body か ら exclude す る side, body に necessary な tech students.their ownship raising material suction 収 を し て い る. こ れ ら viscera の epithelial cells ア ピ カ ル side membrane に は discharge, foreign bodies, を し tech students.their ownship raising material suction 収 を す る clever な molecular メ カ ニ ズ ム と し て 薬 content ト ラ ン ス ポ ー タ ー group が exist す る. は this study, foreign body detoxification と tech students.their ownship keep sucking 収 と い う both sides to の ベ ク ト ル time high transmission を department る の molecular institutions の interpret を refers し, 薬 ト ラ ン ス ポ ー タ ー intramolecular に exist す る の ligands common column を with fixed す る と と も に, そ の match column を know し ト ラ ン ス ポ ー タ ー の function を suppression す る ア ダ プ タ ー タ ン パ ク qualitative の with を purpose Youdaoplaceholder0 た. The Yeast two hybrid method および residue 伝 subunit is replaced with え refining タ <s:1> パ <s:1> <s:1> を を を the <s:1> quality を is carried out by the た たpull-down method によ and solute carrier Superfamily に genus す る 薬 content ト ラ ン ス ポ ー タ ー 20 kinds の C terminal と is crucial, kidney お よ び small intestine に 発 now す る 4 つ の PDZ ド メ イ ン を have す る タ ン パ ク qualitative と の interaction を parsing し た results, ア ピ カ ル membrane に 発 now す る several kinds の ト ラ ン ス ポ ー タ ー と の specific interaction を see い だ し た. こ の う ち renal ア ピ カ ル membrane に bureau in す る PDZ タ ン パ ク qualitative で あ る PDZK1 で, in the presence of ペ プ チ ド ト ラ ン ス ポ ー タ ー PEPT2 お よ び organic カ チ オ ン / カ ル ニ チ ン ト ラ ン ス ポ ー タ ー OCTN2 の matrix can conveying の hyperthyroidism が recognize め ら れ た. Special に OCTN2 に よ る substrate can conveying に and ぼ す promote unseen fruit は 顕 the で あ り, matrix に す seaborne る affinity の variations change で は な く conveying キ ャ パ シ テ ィ ー の about six times as rising の に よ り illustrate で き た. ま た cell surface に 発 now す る OCTN2 を ビ オ チ ン logo と Western blot method に よ り quantitative し た と こ ろ, PDZK1 は OCTN2 の shape on the plasma membrane で の 発 now quantity に は influence を and え て お ら ず, interaction に よ り directly conveying を suppression す る こ と が in stopping さ れ た. Co-immunostaining によ と PDZK1とOCTN2 によ renal urine tubule brush peromonitis に co-localized in する された とが とが shows された. Above の knowledge は, 薬 ト ラ ン ス ポ ー タ ー が ア ピ カ ル membrane に お い て a 々 に 単 exist alone で す る の で は な く, PDZ タ ン パ ク を interface し た ク ラ ス タ ー を form す る こ と に よ り eyewinker の exclude と tech students.their ownship raise content の suction 収 を bear っ て い る こ と を く and shown strong sucking す る も の で あ る.

项目成果

Characterization of renal excretion mechanism for a novel diuretic, M17055, in rats.

新型利尿剂 M17055 在大鼠中肾脏排泄机制的表征。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Pharm.Sci. 93(10)
• 作者: Kato;Yら;T.Nishimuraら
• 通讯作者: T.Nishimuraら

PDZK1 directly regulates the function of organic cation/camitine transporter OCTN2.

PDZK1 直接调节有机阳离子/肉碱转运蛋白 OCTN2 的功能。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Mol.Pharmacol 67(3)
• 作者: Kato;Yら
• 通讯作者: Yら

Screening of the interaction between xenobiotic transporters and PDZ proteins

• DOI: 10.1023/b:pham.0000045244.83999.43
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: PHARMACEUTICAL RESEARCH
• 影响因子: 3.7
• 作者: Kato, Y;Yoshida, K;Tsuji, A
• 通讯作者: Tsuji, A