生理活性ペプチド受容体を標的としたドラッグデリバリーシステムの細胞内挙動の制御

靶向生物活性肽受体的药物递送系统的细胞内行为的控制

• 批准号: 08772056
• 负责人: 加藤 将夫
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772056/
• 关键词: 受容体介在性エンドサイトーシス; ドラッグデリバリーシステム; クリアランス

研究申請者はこれまで、上皮成長因子(EGF)ならびに肝細胞増殖因子といった生理活性ペプチドの特異的受容体を介するreceptor-mediated endocytosis(RME)を速度論的に解析し、その体内動態における重要性を証明してきた。RMEは、生理活性ペプチドの体内動態機構としてばかりでなく、さまざまな薬物の標的部位への選択的な送達や、小腸や肺などにおける吸収促進のためのドラッグデリバリーシステムのターゲットとしても重要である。しかしながらRMEにおいては、取り込まれた薬物の多くはlysosomeで分解を受ける。そこで今回、イヌ腎尿細管上皮細胞由来のMDCK細胞を用い、lysosome分解を受けずに、より効率的に薬物を経細胞輸送させる方法論の確立を目的として検討を行った。クロラミンT法にて得られた^<125>l標識EGFをbasal側より添加し、apical側への経細胞輸送を観察したところ、細胞内蛋白質のmissortingを引き起こすことで知られるブレフェルディンAはEGFの経細胞輸送を促進しなかったものの、トランスフェリンの経細胞輸送を顕著に促進した。このことからこの試薬は経細胞輸送を促進させるsorting modulatorとして有用であるものの、その効果はレセプターによって異なることが明らかとなった。次に、lysosomeでの分解を抑制する試薬(クロロキン、バフィロマイシンA_1、モネンシン、塩化アンモニウム)を用いたところ、これらのうち前者2つはEGFの経細胞輸送を促進する一方、後者はむしろ抑制する方向に働いた。速度論解析の結果、後者2つの試薬は細胞内輸送のすべての過程を阻害する一方、前者2つの試薬も細胞内からapical側への輸送を若干阻害するものの、それ以上に細胞内分解過程を阻害するためにリガンドの細胞内蓄積を引き起こし、結果として経細胞輸送される量が増加することがわかった。以上より、これらもsorting modulatorとして有用である可能性が示唆された。

该研究申请人先前对通过特异性受体（例如表皮生长因子（EGF）和肝细胞生长因子）介导的受体介导的内吞作用（RME）进行了动力学分析，这表明其在体外动力学中的重要性。 RME不仅是生物活性肽的躯体机制，而且还是用于选择性递送各种药物靶向靶位点并促进小肠和肺部吸收的药物输送系统的靶标。但是，在RME中，大多数服用的药物都会降解为溶酶体。因此，我们使用源自犬肾小管上皮细胞的MDCK细胞进行了研究，目的是建立一种方法来更有效地运输药物而不经历溶酶体降解。当从基础侧添加通过氯胺T方法获得的 ^<125> L标记的EGF，并观察到经跨细胞转运到顶端，BrefeldinA A（以引起细胞内蛋白的失误而闻名），但并未促进EGF的跨核转运，但显着促进了转质的转运率转移。这表明，尽管该试剂可作为促进跨细胞运输的分类调节剂有用，但其作用取决于受体。接下来，使用抑制溶酶体降解的试剂（氯喹，bafilycin a_1，monensin，氯化铵）时，其中两个促进了EGF的跨细胞运输，而后者则在更抑制的方向上起作用。动力学分析表明，虽然后两种试剂抑制了细胞内转运的所有过程，但前两种试剂略微抑制了从细胞内到顶端的转运，但它们进一步抑制了细胞内降解过程，从而导致配体的细胞内积累，从而导致易受易受细胞的转运量增加。从以上，已经提出这些可能也可以用作分类调节器。

项目成果

Yukio Kato: "Peptide and protein delivery targeted to receptor-mediated endocytosis. Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems" (印刷中).

加藤幸雄：“针对受体介导的内吞作用的肽和蛋白质递送。治疗药物载体系统的批判性评论”（正在出版）。

Yukio Kato: "Kinetic analysis of receptor-mediated endocytosis (RME) of proteins and peptides : Use of RME as a drug delivery system." Journal of Controlled Release. 39. 191-200 (1996)

Yukio Kato：“蛋白质和肽的受体介导的内吞作用 (RME) 的动力学分析：使用 RME 作为药物输送系统。”

Yuichi Sugiyama: Receptor-mediated targeting of peptides and proteins. Springer-Verlag Tokyo Advanced Biomaterials in Biomedical Engineering and Drug Delivery Systems, (1996)

Yuichi Sugiyama：受体介导的肽和蛋白质靶向。