权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

機能性脂質ドメイン(ラフト)におけるコレステロールとタンパク質の相互作用の解析

功能性脂质域（筏）中胆固醇和蛋白质之间相互作用的分析

基本信息

批准号：
16048209
负责人：
片平正人
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Yokohama National University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16048209/
关键词：
ラフトコレステロール毒素 Perfringolysin 0 生体膜立体構造 NMR タンパク質

项目摘要

我々はプロテアーゼによる限定分解と化学修飾を施して無毒化したPFOタンパク質が、ラフトを検出するプローブとして利用できる事を見出した。さらにPFOタンパク質中の約110アミノ酸からなる部位(D4)が、ラフト中のコレステロールへの選択的な結合能を有する事が分かった。これまでD4は、大腸菌で大量発現させ、菌体破砕後の可溶性画分から調製していた。今回不溶性画分から大量に調製する方法を確立した。TritonX-100で洗浄し、グアニジンで可溶化し、ここにアルギニンを加えた。これを透析してグアニジン濃度を下げる事でリフォールディングを行った。得られたD4は従来の方法で調製したものと同様のCDスペクトルを与えた。^<13>C,^<15>N2重標識したD4を同様の手法で調製し、現在3重共鳴NMR法による共鳴線の帰属を進行させているところである。次に膜環境を模した状態における構造解析を行う為に、D4をミセルに取り込ませる事を試みた。各種のdetergentを試みた結果、DPCが最も良好な結果を与えた。この状態におけるCDスペクトルは、水中におけるものとは少し異なっていた。さらにより膜の環境に近づける為に、コレステロール含有のリポソームを調製し、そこにD4を取り込ませた。この状態のCDスペクトルも、水中におけるものとは少し異なっていた。今後はこの系に転移交差飽和法を適用する事によって、D4とコレステロール及びD4と脂質の相互作用様式を同定できると考えられる。タンパク質とリガンドの複合体の構造決定及び水素結合の同定手法の開発等も行なったが、これらの技術は、今後膜結合に伴うPFOタンパク質の構造変化及びコレステロール・脂質との結合様式の原子レベルの分解能での解明に利用できる。

We have a limited number of chemical modifications, and we have a lot of chemical modifications. About 110 percent of the PFO molecules were found in the acid sites (D4), and the binding energies of the selected molecules in the PFO molecules were found to be related. D4 and E. coli were found in large quantities, and soluble proteins were prepared after cell disruption. The method of mass modulation of insoluble paint is established. TritonX-100 is soluble, soluble and soluble. The first step is to reduce the risk of infection. D4 is the only way to modulate and synchronize CD. <13>C,^<15>N2-fold identification and D4-fold resonance modulation are performed by 3-fold resonance NMR method. For example, if you want to change your mind, you can change your mind. All kinds of detergent test results, DPC and best results The state of affairs is different from that of water. The environment of the film is close to the ground, and the film contains a variety of materials. The state of the CD is different from the water. In the future, the system of shift saturation method is applicable to the interaction between D4 and lipid. The structural determination of the complex of the compound and the development of the isostatic method of the binding of the water element are carried out in the following ways: the technology of the membrane binding in the future is accompanied by the structural transformation of the PFO compound and the utilization of the atomic decomposition energy of the binding formula of the lipid.