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ラフトのコレステロールに結合するPFOタンパク質の構造遷移と相互作用様式の解明

阐明筏中与胆固醇结合的 PFO 蛋白的结构转变和相互作用模式

基本信息

批准号：
17048009
负责人：
片平正人
金额：
$ 4.1万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

PFOタンパク質を用いたラフトの細分化及び構造解析に向けた試料調製の改良従来「ラフト画分」として用いられてきた界面活性剤に不溶性の低密度膜画分から、コレステロール含有率の高い膜サブセットを分離する手法を確立した。この手法を用いてJurkat細胞から分離したBC-PFO結合性のラフト膜サブセットには、フロチリン、ガングリオシドGM1等のラフトマーカー分子の他に、Lck, LAT, PAG等のT細胞情報伝達を正・負に制御する分子群が検出された。一方、受容体刺激による活性化に伴って、BC-PFO結合性の膜領域に移行してくる分子の存在も明らかになった。PFOタンパク質の構造及びコレステロール・脂質との相互作用様式の解析を、ドメイン4(D4)を用いて進行させた。大腸菌の菌体破砕液の不溶性画分に存在するD4を、アルギニン法によってリフォールディングする事で、これまでに100FMの濃度のD4試料を安定して調製できるようになっていた。今回さらに試料調製法の改良(凝集防止剤(本領域の群馬大学・若松先生よりご提供)の添加、リフォールディング・濃縮工程の修正、サンプル管のシリコン加工等)を行った結果、500μMの濃度のD4試料を得る事に成功した。タンパク質の安定性に関しても、調製されたタンパク質はこれまで数時間程度しか良好なスペクトルを与えなかったが、今回それを1週間程度まで伸ばす事に成功した。現在この試料を用いて3次元スペクトルの測定を行い、主鎖の帰属を進行させている。

The method of separating insoluble low density film with high content of surfactant and high density film with high content of surfactant was established. This technique is used to isolate Jurkat cells from BC-PFO binding molecules such as T-cell, Lck, LAT, PAG, etc., and to detect groups of molecules that are positive and negative controls of T-cell information transmission. The activity of a molecule in the membrane domain of BC-PFO binding is stimulated by a receptor. The structure of PFO and the interaction between PFO and lipid are analyzed in detail in Table 4(D4) The presence of D4 in the insoluble fraction of Escherichia coli bacteria in the solution was determined by the method of "D4" and "D4". The concentration of D4 in the solution was 100FM. In this paper, the improvement of sample preparation method (addition of aggregation prevention agent (provided by Mr. Wakamatsu of Gunma University in this field), correction of concentration engineering, and processing of concentration tube) was successfully carried out. The stability of the product is related to the quality of the product, and the quality of the product is adjusted to a certain degree. Now the test material is used in the determination of the three dimensional space, the main lock is used in the determination of the three dimensional space

项目成果

期刊论文数量（22）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Structure of human telomeric DNA under physiological ionic conditions stabilized by proper incorporation of 8-bromoguanosines, as determined by NMR

通过 NMR 测定，通过适当掺入 8-溴鸟苷而稳定生理离子条件下的人端粒 DNA 结构

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
FEBS J (印刷中)
影响因子：
0
作者：
Matsugami;M他
通讯作者：
M他

Unichrom, a novel nuclear matrix protein, binds to the Ars insulator and canonical MARs

Unichrom 是一种新型核基质蛋白，可与 Ars 绝缘体和典型 MAR 结合

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Zoological Science 23
影响因子：
0
作者：
Tagashira;H他
通讯作者：
H他

a novel nuclear matrix protein, binds to the Ars insulator and canonical MARs

一种新型核基质蛋白，与 Ars 绝缘体和典型 MAR 结合

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Zoological science 23
影响因子：
0
作者：
Tagashira;H.;Shimotori;T.;Sakamoto;N.;Katahira;M.;Miyanoiri;Y.;Yamamoto;T.;Mitsunaga-Nakatsubo;K.;Kusunoki;S.;Akasaka;K.;Unichrom
通讯作者：
Unichrom

NMRによるタンパク質構造解析の展望

NMR 蛋白质结构分析的前景