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ラフトのコレステロールに結合するPFOタンパク質の構造遷移と相互作用様式の解明

ラフトのコレステロールに結合するPFOタンパク質の構造遷移と相互作用様式の解明
阐明筏中与胆固醇结合的 PFO 蛋白的结构转变和相互作用模式
批准号：
17048009
负责人：
片平 正人
金额：
$4.1万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2005 至 2006
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17048009/
关键词：
ラフトPFOタンパク質コレステロールNMR構造リポソームイオンチャネル核酸生体分子生物物理蛋白質立体構造膜

项目摘要

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PFOタンパク質を用いたラフトの細分化及び構造解析に向けた試料調製の改良従来「ラフト画分」として用いられてきた界面活性剤に不溶性の低密度膜画分から、コレステロール含有率の高い膜サブセットを分離する手法を確立した。この手法を用いてJurkat細胞から分離したBC-PFO結合性のラフト膜サブセットには、フロチリン、ガングリオシドGM1等のラフトマーカー分子の他に、Lck, LAT, PAG等のT細胞情報伝達を正・負に制御する分子群が検出された。一方、受容体刺激による活性化に伴って、BC-PFO結合性の膜領域に移行してくる分子の存在も明らかになった。PFOタンパク質の構造及びコレステロール・脂質との相互作用様式の解析を、ドメイン4(D4)を用いて進行させた。大腸菌の菌体破砕液の不溶性画分に存在するD4を、アルギニン法によってリフォールディングする事で、これまでに100FMの濃度のD4試料を安定して調製できるようになっていた。今回さらに試料調製法の改良(凝集防止剤(本領域の群馬大学・若松先生よりご提供)の添加、リフォールディング・濃縮工程の修正、サンプル管のシリコン加工等)を行った結果、500μMの濃度のD4試料を得る事に成功した。タンパク質の安定性に関しても、調製されたタンパク質はこれまで数時間程度しか良好なスペクトルを与えなかったが、今回それを1週間程度まで伸ばす事に成功した。現在この試料を用いて3次元スペクトルの測定を行い、主鎖の帰属を進行させている。
期刊论文(22)
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科研奖励(0)
会议论文
Structure of human telomeric DNA under physiological ionic conditions stabilized by proper incorporation of 8-bromoguanosines, as determined by NMR
通过 NMR 测定，通过适当掺入 8-溴鸟苷而稳定生理离子条件下的人端粒 DNA 结构
DOI： --
发表时间： 2007
期刊： FEBS J (印刷中)
影响因子： --
作者： [Matsugami, M他]
通讯作者： M他
Unichrom, a novel nuclear matrix protein, binds to the Ars insulator and canonical MARs
Unichrom 是一种新型核基质蛋白，可与 Ars 绝缘体和典型 MAR 结合
DOI： --
发表时间： 2006
期刊： Zoological Science 23
影响因子： --
作者： [Tagashira, H他]
通讯作者： H他
a novel nuclear matrix protein, binds to the Ars insulator and canonical MARs
一种新型核基质蛋白，与 Ars 绝缘体和典型 MAR 结合
DOI： --
发表时间： 2006
期刊： Zoological science 23
影响因子： --
作者： [Tagashira, H., Shimotori, T., Sakamoto, N., Katahira, M., Miyanoiri, Y., Yamamoto, T., Mitsunaga-Nakatsubo, K., Kusunoki, S., Akasaka, K., Unichrom]
通讯作者： Unichrom
NMRによるタンパク質構造解析の展望
NMR 蛋白质结构分析的前景
DOI： --
发表时间： 2006
期刊： 酵素工学ニュース 55
影响因子： --
作者： [Nakagama, H他, 宮ノ入洋平他]
通讯作者： 宮ノ入洋平他
共 20 条
    核酸の塩基対の開閉挙動及びリガンドとの相互作用の試験管内と生細胞中における違い
    • 批准号：
      23K27112
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $6.99万
    • 财政年份：
      2024
    • 负责人：
      片平 正人
    • 依托单位：
      Kyoto University
    核酸の塩基対の開閉挙動及びリガンドとの相互作用の試験管内と生細胞中における違い
    • 批准号：
      23H02419
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $12.06万
    • 财政年份：
      2023
    • 负责人：
      片平 正人
    • 依托单位：
      Kyoto University
    Structural basis of LLPS of RNA repeats related to neurodegenerative diseases
    • 批准号：
      20H03192
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $11.4万
    • 财政年份：
      2020
    • 负责人：
      片平 正人
    • 依托单位：
      Kyoto University
    核酸4重鎖構造をベースにした核酸性イオンチャネルの創製
    • 批准号：
      19657034
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.37万
    • 财政年份：
      2007
    • 负责人：
      片平 正人
    • 依托单位：
      Yokohama City University