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hnRNP D、FMRP及びアプタマーによる遺伝情報発現制御の分子基盤

hnRNP D、FMRP和适体控制遗传信息表达的分子基础

基本信息

批准号：
15030214
负责人：
片平正人
金额：
$ 4.1万
依托单位：
Yokohama National University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)hnRNP Dタンパク質-テロメアDNAテロメア配列DNA d(TTAGGG)とhnRNP Dタンパク質の2つ目の核酸結合ドメイン(BD2)の複合体の構造をNMRにより決定した。BD2はd(TTAGGG)のT2,A3,G4の3残基と主に相互作用していることが分かった。T2の塩基はY244,E253及びK255の側鎖と水素結合を形成していた。A3及びG4の塩基は各々F185及びF227とスタッキング相互作用をしていた。またA3の塩基はA257及びM258と疎水相互作用を、一方G4の塩基はK183の側鎖及びM258の主鎖と水素結合を形成していた。G4に関しては、リン酸基との静電相互作用も見られた。テロメア配列のDNAは生理的なイオン環境下で、容易に4重鎖構造を形成する。hnRNP Dは複合体形成に伴ってこの4重鎖をアンフォールドする事が滴定実験より分かった。この活性を利用してDNAに対する分子シャペロンとして働く事で、hnRNP Dはテロメア伸長を制御している可能性がある。(2)HIV Tatタンパク質-RNAアプタマーTatタンパク質のRNA結合部位の部分ペプチドであるRKKRRを用いRNAアプタマーとの複合体の解析を行った。RKKRRの添加によってRNAアプタマーに大きな構造変化が生じることが分かった。またアルギニンアミドはRNA1分子あたり2分子結合したのに対し、RKKRRはRNAアプタマー1分子あたり1分子のみ結合することが分かった。RNAアプタマーには上下2つのタンパク質結合ドメインがある。RNAとRKKRR間の分子間NOEに基づき、結合様式の概略を決定した。上下の結合ドメインでTatタンパク質の異なる2つのアルギニン残基と同時に結合することで、RNAアプタマーは高い親和性を発揮していると考えられる。

（1）hnRNP D脱氧核糖核酸-脱氧核糖核酸配位序列DNA d（TTAGGG）hnRNP D脱氧核糖核酸2个碱基的核酸合成酶标（BD2）核糖体合成核磁共振谱要求确定。BD2-d（TTAGGG）-T2，A3，G4 - 3烃基主偶相互作用的偶氮杂环。T2邻苯二甲酸基酯Y244、E253及邻苯二甲酸K255邻苯二甲酸水素复合形成的正构烷烃。A3及AG 4水泥基复合墙板各墙板F185及水泥F227水泥基复合墙板相互作用的骨架。一方G4介导基片K183介导基片A257与介导M258介导水元素相互作用，一方G4介导基片K183介导基片A257与介导M258介导基片K183介导水元素复合形成介导水元素。G4磷酸氢钙，磷酸氢钙镇静剂，相互作用的磷酸氢钙。将DNA序列配成DNA非生理的寡核苷酸寡核苷酸环境下，容易使4重脱氧核糖核酸制造形成突变。hnRNP D类复合体形成的合伙人资格证书由4个重合同债务人组成。DNA酶活性利用同源DNA引物扩增DNA片段，hnRNP D引物扩增DNA片段，制备同源DNA片段。（2）HIV达特核糖核酸酶联免疫吸附试验-RNA酶联免疫吸附试验达特核糖核酸酶联免疫吸附试验RKKRR利用核糖核酸酶联免疫吸附试验检测核糖核酸酶联免疫吸附试验。RKKRR添加核糖核酸模板RNA，构建大规模的核糖核酸制造细胞化生物降解酶。RKKRR核糖核酸酶1分分子杂交申请2分分子杂交申请，RKKRR核糖核酸酶1分分子杂交申请1分分子杂交申请2分分子杂交申请。RNA核糖核酸酶抑制剂上下游2个核苷酸间的相互作用。RNA酶RKKRR寡核苷酸分子NOE寡核苷酸，结合型寡核苷酸概述确定。上下游结合蛋白酶抑制剂达特Tat蛋白酶抑制剂2，RNA结合蛋白酶抑制剂高亲和力和性功能蛋白酶抑制剂低亲和力。