細胞運動刺激因子の立体構造に基づく腫瘍転移抑制剤の開発

基于细胞运动刺激因子三维结构开发肿瘤转移抑制剂

• 批准号: 17012021
• 负责人: 田中 信忠
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17012021/
• 关键词: がん; ドラッグデザイン; 転移; 結晶; X線; 立体構造; 構造生物学; 阻害剤

本研究では、腫瘍細胞が細胞外に分泌し産生細胞の運動を刺激する2種類の自己分泌型細胞運動刺激因子(「Autocrine Motility Factor、以下AMFと略」と「Autotaxin、以下ATXと略」)の腫瘍転移における作用機序を分子レベルで解明し立体構造に基づく腫瘍転移抑制剤の合理的開発を実現するため、両者に関する構造生物学的研究を行う。即ち、本研究の一つの柱は「AMFの立体構造解析」、もう一つの柱が「ATXの立体構造解析」である。AMFに関しては、大腸菌を用いて発現させ、2段階のカラム操作で精製したmAMFを用いて結晶化を行い、板状結晶を得ることに成功した。共結晶化法により、8種類の阻害剤との複合体結晶の調製にも成功した。シンクロトロン放射光を用い、回折強度データの収集を行った。分子置換法による位相決定、構造精密化を行い、各種阻害剤複合体に関し高分解能の立体構造を得ることができた。その結果、阻害剤の構造機能相関に関する知見を得ることができた。すなわち、阻害剤の嵩高さ(炭素鎖の長さ)と阻害活性との間には相関が見られた。嵩の小さい阻害剤(炭素鎖数4及び5)複合体の場合水分子が結合していた部位を、嵩高い阻害剤(炭素鎖数6)複合体では官能基が占有しており、後者の阻害剤が統計的に有意に有効であった。これらの知見は、新規阻害剤デザインに有用である。ATXに関しては、N末端からある長さを削った2種類のコンストラクトに関し、大腸菌を用いた組換え蛋白質の発現系構築に成功した。いずれに関しても、天然型と同様の細胞運動刺激活性を保持していた。これらに関し、大腸菌の大量培養・精製を行い、結晶化条件を探索中である。しかし、まだ得られる精製サンプル量が十分ではないため、さらなる発現・精製条件の改良が必要である。

In this study, the extracelluar secreted cytokines ("Autocrine Motility Factor, following AMF", "Autotaxin, below ATX") secreted by the extracelluar cells of human and mother cells have been shown to be responsible for the transfer of cellular kinesis. the molecular understanding of the molecular sequence shows that there is a reasonable response to the inhibition of gene transfer in stereoscopic products. The researchers are interested in the study of biology. That is to say, in this study, one column is "AMF stereoscopic analysis", and the other is "ATX stereo analysis". The results showed that the AMF was successful, the mAMF was successfully crystallized by the crystallization of the glass, and the results of the plate were obtained. The results showed that the crystal structure of the complex was successfully tested by crystallization method. In this paper, the radiation is used, and the strength of the refraction is measured. The molecular method is used to determine the phase, to make precision products, and to produce high resolution compounds for all kinds of hindrances. The result of the test and the hindrance to the machine can make sure that the information is known to each other. The effect of carbon dioxide on the activity of resistance is different from that of carbon dioxide. The complex of Songlang (carbon number 4 and 5), the combination of water molecules and the site of Songgao block (carbon number 6), the functional base of Songgao (carbon number 6), and the latter, there is an interest in the statistics of hindrance data. New laws and regulations prevent people from knowing what they think and how useful they are. ATX, N-terminal, N-terminal and large bacteria. The activity of cellular stimulation was maintained in the same cell of the natural type and the natural type. The conditions of crystallization are in the process of being explored. If you don't know what you're going to do, you need to know that it's necessary to improve your conditions.

项目成果

Differential Regulation of Phosphoglucose Isomerase/Autocrine Motility Factor Activities by Protein Kinase CK2 Phosphorylation*

• DOI: 10.1074/jbc.m409457200
• 发表时间: 2005-03
• 期刊: Journal of Biological Chemistry
• 影响因子: 4.8
• 作者: T. Yanagawa;T. Funasaka;S. Tsutsumi;Tirza Raz;N. Tanaka;A. Raz

Crystal structures of mouse autocrine motility factor in complex with carbohydrate phosphate inhibitors provide insight into structure-function relationship of the inhibitors.

小鼠自分泌运动因子与碳水化合物磷酸盐抑制剂复合物的晶体结构提供了对抑制剂结构-功能关系的深入了解。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J.Mol.Biol. 356
• 作者: Tanaka;N.et al.
• 通讯作者: N.et al.