がん細胞運動刺激因子による細胞外受容体認識機構の解明

阐明癌细胞运动刺激因子的细胞外受体识别机制

• 批准号: 14780479
• 负责人: 田中 信忠
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780479/
• 关键词: 構造生物学; 結晶構造解析; 結晶化; X線; 腫瘍; がん; サイトカイン; 転移

ヒト黒色腫細胞、ヒト繊維肉腫細胞から単離された、ヒト由来自己分泌型がん細胞運動刺激因子(human autocrine motility factor,以下hAMFと略)は、細胞外に分泌され、産生細胞自体の運動を刺激する、ホモ2量体(2x558アミノ酸残基)サイトカインである。本研究では、がん転移抑制剤の合理的デザインへ向けた手掛りを得るため、hAMFとその阻害剤との複合体の立体構造、およびhAMFの受容体である、hAMFRの立体構造を解明することを目指している。平成14年度までに、我々は、hAMFの立体構造解析に成功し、部位特異的置換実験の結果と合わせ、AMFの機能発現には、糖タンパクであるAMFRの糖鎖認識が重要であるという知見を得た。15年度及び今年度は、マウスAMF(mAMF)の発現・精製・結晶化・構造決定を行った。大腸菌を用いて発現させ、2段階のカラム操作で精製したmAMFを用いて結晶化を行い、板状結晶を得ることに成功した。共結晶化法により、8種類の阻害剤との複合体結晶の調製にも成功した。筑波のPhoton Factory、播磨のSPring-8のシンクロトロン放射光を用い、回折強度データの収集を行った。分子置換法による位相決定、構造精密化を行い、各種阻害剤複合体に関し、高分解能の立体構造を得ることができた。その結果、阻害剤の構造機能相関に関する知見を得ることができた。

Black tumor cells and white tumor cells are isolated and secreted by themselves. Human autocrine motility factor (hAMF) is secreted outside the cell and stimulates the cell's own movement. Two quantities (2x558 amino acid residues) are secreted. In this study, the reasonable structure of hAMF and its inhibitor complex, the receptor of hAMF and the three-dimensional structure of hAMFR were studied. In the 14th year of Heisei, we have achieved success in the analysis of the three-dimensional structure of hAMF, the results and integration of site-specific replacement, and the functional discovery of AMF. Therefore, the understanding of AMFR's sugar lock is important. 15 years and this year, AMF(mAMF) development, refinement, crystallization, structural determination Escherichia coli was successfully crystallized in the middle and in the middle of the two-stage process. The co-crystallization method was successful in the modulation of 8 kinds of inhibitors and complex crystals. Tsukuba Photon Factory, Haro SPring-8, reflection intensity, collection Molecular replacement method for phase determination, structural precision, a variety of resistance agent complex, high resolution energy and three-dimensional structure The results of the test and the structural function of the resistance agent are related to each other.

项目成果

Tsutsurni, S., et al.: "The enzymatic activity of phosphoglucose isomerase is not required for itscytokine function."FEBS Lett.. 534. 49-53 (2003)

Tsutsurni, S., 等人：“磷酸葡萄糖异构酶的酶活性并不是其细胞因子功能所必需的。”FEBS Lett.. 534. 49-53 (2003)

Crystallization and preliminary X-ray crystallographic studies of mouse autocrine motility factor.

小鼠自分泌运动因子的结晶和初步 X 射线晶体学研究。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Acta Cryst. D60
• 作者: Naba N;Tanaka N;Shiraiwa K;Kusakabe Y;Funasaka T;Haga A;Nagase N;Raz A;Nakamura;KT
• 通讯作者: KT

Tsutsumi, S., et al.: "The enzymatic activity of phosphoglucose isomerase is not required for itscytokine function."FEBS Lett.. 534. 49-53 (2003)

Tsutsumi, S. 等人：“磷酸葡萄糖异构酶的酶活性并不是其细胞因子功能所必需的。”FEBS Lett.. 534. 49-53 (2003)

田中信忠: "ヒト由来自己分泌型がん細胞運動刺激因子の立体構造解析"日本結晶学会誌. 45. 335-340 (2003)

田中信忠：“人自分泌癌细胞运动刺激因子的结构分析”日本晶体学会杂志45。335-340（2003）。

Uemura, H., et al.: "Crystallization and preliminary X-ray crystallographic studies of human autocrine motility factor."Protein and Peptide Lett.. 8. 317-322 (2001)

Uemura, H., et al.：“人类自分泌运动因子的结晶和初步 X 射线晶体学研究。”Protein and Peptide Lett.. 8. 317-322 (2001)