自己分泌型がん細胞運動刺激因子の構造生物学的研究

自分泌癌细胞运动刺激因子的结构生物学研究

• 批准号: 13033037
• 负责人: 田中 信忠
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13033037/
• 关键词: 構造生物学; 結晶構造解析; 結晶化; X線; 腫瘍; がん; サイトカイン; 転移

ヒト黒色腫細胞、ヒト繊維肉腫細胞から単離された、ヒト由来自己分泌型がん細胞運動刺激因子(human autocrine motility factor,以下hAMFと略)は、細胞外に分泌され、産生細胞自体の運動を刺激する、ホモ2量体(2x558アミノ酸残基)サイトカインである。本研究では、がん転移抑制剤の合理的デザインへ向けた手掛りを得るため、hAMFとその阻害剤との複合体の立体構造、およびhAMFの受容体である、hAMFRの立体構造を解明することを目指している。蒸気拡散法により、ポリエチレングリコール8000を沈殿剤として用い、組換え型hAMFの結晶化を行った。細い柱状結晶が再現性良く得られるようになった。筑波のフォトンファクトリーにおいて、回折強度データの収集を行い、1.9Å分解能までの回折強度データを得ることができた。得られた結晶の空間群はP2_12_12_1、格子定数はa=80.58Å,b=107.4Å,c=270.7Åであり、結晶の非対称単位中には4サブユニット(2分子の2量体:2x2x558アミノ酸残基)が含まれていた。結晶の溶媒含量は、47%であった。ウサギ由来ホスホグルコースイソメラーゼをサーチモデルとした分子置換法により位相を決定し、1.9Å構造精密化を行った。次いで、AMFとAMFのサイトカイン活性を阻害する阻害剤との複合体の立体構造を解明するため、数種の阻害剤との複合体結晶の調製を試みた。その結果、エリスロース4リン酸(E4P)との複合体結晶の調製に成功し、hAMF/E4P複合体の立体構造を2.4Å分解能で決定することができた。マウスAMF(mAMF)に関しても、大腸菌を用いた組換えタンパクの大量調製を行い、結晶化条件の探索を行った。その結果、mAMFに関しても、阻害剤フリーおよび数種の阻害剤存在下で、X線結晶構造解析に使える単結晶を得ることに成功した。

The secreted cytokines (human autocrine motility factor, the following hAMF), exocrine cytokines, autologous motility stimulators, and 2x558 acid residues were isolated from the dark cells and meat cells of the mackerel, and derived from their own secreted cellular motility stimulator (human autocrine motility factor). The purpose of this study is to find out that there is a reasonable method of migration inhibition in this study, that is to say, it is reasonable to know that there is a problem in the construction of the complex, hAMF and hAMFR stereoscopes. The method of steaming and dispersing was used to study the crystallization of hAMF. The results showed that there was no difference between the two groups in 8000. The columnar results show that the sex is good and the sex is good. In Tsukuba, the bending strength is very high, the bending strength is fine, and the decomposition strength is 1.9%. The results show that there is a molecular weight in the unsymmetrical site (2 molecular weight: 2x2x558 acid residue) in the empty crystal group P212: 12121, lattice number 80.58, bod 107.4, cCl7 270.7, and the unsymmetrical site. The results showed that the solvent content was low, and 47% of the total alcohol content was low. The cause of the problem is that the molecular method is used to determine the phase, and 1.9 to make the precision line. Secondary and AMF

项目成果

Tanaka, N., et al.: "Inhibition mechanism of cytokine activity of human autocrine motility factor examined by crystal structure analyses and site-directed mutagenesis studies."J.Mol.Biol.. 318. 985-997 (2002)

Tanaka, N., 等人：“通过晶体结构分析和定点诱变研究检查人自分泌运动因子的细胞因子活性的抑制机制。”J.Mol.Biol.. 318. 985-997 (2002)

Uemura, H., et al.: "Crystallization and preliminary X-ray crystallographic studies of human autoerine motility factor"Protein and Peptide Lett. 8. 317-322 (2001)

Uemura, H., et al.：“人自体运动因子的结晶和初步 X 射线晶体学研究”蛋白质和肽 Lett。

Uemura, H., et al.: "Crystallization and preliminary X-ray crystallographic studies of human autocrine motility factor"Protein and Peptide Letters. 8. 317-322 (2001)

Uemura, H. 等人：“人类自分泌运动因子的结晶和初步 X 射线晶体学研究”蛋白质和肽快报。

Tsutsumi, S., et al.: "The enzymatic activity of phosphoglucose isomerase is not required for its cytokine function"FEES Lett.. 534. 49-53 (2003)

Tsutsumi, S. 等人：“磷酸葡萄糖异构酶的酶活性并不是其细胞因子功能所必需的”FEES Lett.. 534. 49-53 (2003)