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プロテオーム解析によるインスリン感受性調節機構の解明と新規治療ターゲットの発見

通过蛋白质组分析阐明胰岛素敏感性调节机制并发现新的治疗靶点

基本信息

批准号：
17019010
负责人：
浅野知一郎
金额：
$ 2.88万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

I.インスリン作用や糖・脂質代謝に重要な蛋白の修飾や結合蛋白の同定まず、IRS-1、IRS-2、p110αとp110β、Akt、GSK3β、PTEN、calpain 10、c/EBPα、PPARα、PPARγ、FOXO1、AMPK、LKB1等について、MEF tagを取り付けたcDNAコンストラクトを作成し、アデノウイルスで発現させることに成功した。これらは、アデノウイルスを静脈注射することで、マウスの肝臓に発現させた後、MEFタグを用いて複合体を精製し、LC-MS/MSを用いて、解析を行った。データベース(Masccot)に照合したところ、いずれのタンパクについても、複合体に含まれる可能性のあるタンパクとして100から250程度が同定された。同時にこれらのbaitタンパクを安定的に発現するHEpG2細胞を作成し、これを用いた結果と比較することで、重要なタンパクの結合を同定しようと努力を続けている状況である。II.GLUT4、LDL受容体、インスリン受容体含有小胞特異的蛋白の構造及び機能の解析GLUT1及びGLUT4のC末端にMEFタグを取り付けた蛋白をコードするcDNAを作成し、これらを発現するアデノウイルスを作製した。これを3T3-L1脂肪細胞や培養筋肉細胞に発現させ、MEFタグによって、高純度の蛋白含有小胞を精製する計画であったが、局所へのアデノウイルス注入で、高い効率での発現が容易には得られなかった。そこで、LacZのアデノウイルスを用い、多くの条件で検討することによって、副睾丸上脂肪組織全体に高い効率で発現させる条件を樹立できた。これから、GLUT1及びGLUT4を脂肪組織に発現させる検討を行う段階である。

I. The role of protein in sugar and lipid metabolism and the modification of binding protein identity, IRS-1, IRS-2, p110α, p110β, Akt, GSK3 β, PTEN, calpain 10, c/EBPα, PPARα, PPARγ, FOXO1, AMPK, LKB1, etc. After intravenous injection, MEF complex was purified and analyzed by LC-MS/MS The probability of the complex is 100 to 250 degrees. At the same time, HEpG2 cells were produced and used for stable development. The results were compared and important for stable development. II. Analysis of the Structure and Function of GLUT4, LDL Receptors, and Receptors Containing Cell-Specific Proteins GLUT1 and GLUT4 C-terminal MEF Receptors The 3T3-L1 adipocytes and muscle cells were found to have high purity protein and cell purification. The conditions for the occurrence of high percentage of total epididymal fat are established. GLUT1 and GLUT4 are found in subcutaneous fat.