PI 3-キナーゼやc-Akt活性化に伴って発現が誘導される遺伝子群のクローニング

PI 3-激酶和 c-Akt 激活后诱导表达的基因的克隆

• 批准号: 10877177
• 负责人: 浅野 知一郎
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877177/
• 关键词: PI 3-キナーゼ; c-Akt; サブトラクションクローニング; 3T3-L1脂肪細胞; 細胞内情報伝達

本研究は、活性型のPI3-キナーゼを細胞に強制発現後mRNAを抽出し、対照との差をサブトラクション法で調べることにより、PI3-キナーゼが発現を誘導する遺伝子の同定を試みたものである。細胞は、ラットの肝・骨格筋細胞と3T3-Ll脂肪細胞を用いた。その結果、肝細胞で96種(既知の遺伝子と相同性あり44種、なし52種)、骨格筋細胞で65種(相同性あり39種、なし26種)、脂肪細胞で35種(相同性あり18種、なし17種)のクローンが得られた。既知の遺伝子としては、肝細胞ではglucosyltransferaseなどの糖代謝酵素、糖輸送担体GLUT2、アポ蛋白A-IVなどが含まれていた。脂肪細胞ではMMTPのような脂肪代謝に関する蛋白が、骨格筋細胞ではGLUT4小胞に存在するアミノペプチダーゼなどの糖取り込みへの関与が想定される蛋白が含まれていた。これらの遺伝子はすべてRT-PCRやRNase protection assayを行い、PI3-キナーゼ活性化による発現の増加を確認した。一方、既知の遺伝子と相同性のないものの中には、ESTとして報告されているものがあり、AA403748、W98700など多くが各細胞に共通して得られた。一例としてAA403748は、PKC-binding proteinと一部のみ相同性があり細胞内情報伝達に重要と思われたため、この遺伝子の全長をクローニングし、その機能を検討中である。以上の作業によって、PI3-キナーゼやc-Aktといった細胞内情報伝達のkey enzymeがどのような遺伝子発現をもたらすかという全貌の一端が解明されつつある。本研究は、細胞内情報伝達を従来のシグナルの「パスウェイ」から、遺伝子発現を含めたシグナルの「ネットワーク」として理解するための新しい方向性の研究であり、今後もさらなる発展が期待できると思われる。

In this study, the expression of PI3-mRNA was detected after stress in cells, and the expression of PI3-mRNA was induced by different methods. Cell, liver, bone, muscle cells, 3T3-Ll fat cells The results showed that 96 kinds of hepatocytes (44 kinds and 52 kinds of known genes), 65 kinds of skeletal muscle cells (39 kinds and 26 kinds of genes), and 35 kinds of adipocytes (18 kinds and 17 kinds of genes) were obtained. It is well known that the expression of glucosyltransferase, glucose transporter 2 and protein A-IV in liver cells is related to glucose metabolism. Fat cells contain proteins related to MMTP and fat metabolism, while skeletal muscle cells contain proteins related to GLUT4. The RT-PCR and RNase protection assay was performed and the increase in PI3-mRNA activation was confirmed. A party, known to the original son and identity of the middle, EST and report of the middle, AA403748, W98700 and more common to all cells A case of PKC-binding protein AA403748 was reported. The above operations are carried out in the presence of PI3-C-Akt, a key enzyme for intracellular information transmission, and the presence of C-Akt. This study is aimed at exploring new directions for the development of intracellular information transmission and gene discovery, including the understanding of intracellular information transmission and gene development.

项目成果

Arai,M.et al: "Altered expression levels and impaired steps in the pathmay to plusphetidylimos 3-Kinase activation via insulin receptor substrates 1 and 2 in zucker fatty." Diabetes. 47. 13-23 (1998)

Arai,M.等人：“在 zucker 脂肪中，通过胰岛素受体底物 1 和 2 改变了 plusphetidylimos 3-激酶激活路径中的表达水平和受损步骤。”

Arai,M.et al.: "Enhanced insulin-stimulated activation of PI3-Kinase in the liver of high-fat fed rats" Diabetes. 48. 158-169 (1999)

Arai,M.等人：“高脂喂养大鼠肝脏中胰岛素刺激的 PI3 激酶激活增强”糖尿病。

Anai,M.et al.: "Differential subcellular distribution and regulation of expression of IRS-3 from those of IRS-1 and IRS-2" J.Biol.Chem.273. 29686-29692 (1998)

Anai,M.et al.：“IRS-3 与 IRS-1 和 IRS-2 的不同亚细胞分布和表达调节”J.Biol.Chem.273。

Terasaki,J.et al.: "Role of JTT-SO1,a new insulin sensitizer,in restoring impaired GLUT4 franslocation in adipocytes of rats fed a high fat diet." Diabetologia. 41. 406-409 (1998)

Terasaki, J. 等人：“JTT-SO1（一种新型胰岛素增敏剂）在恢复高脂肪饮食大鼠脂肪细胞中受损的 GLUT4 易位方面的作用。”

Nakazaki,M.et al.: "Repetive mitochondrial Ca^<2+> signals syrchronize with cytosolic Ca^<2+> oscillations in the pancreatic beta-cell line,MIN6" Diabetologia. 41. 279-286 (1998)

Nakazaki,M.et al.：“重复的线粒体 Ca^<2> 信号与胰腺 β 细胞系 MIN6 中的胞质 Ca^<2> 振荡同步”糖尿病学。