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線状プラスミドpSLA2-Lにコードされた二次代謝遺伝子群の機能解析とその応用

线性质粒pSLA2-L编码的次级代谢基因的功能分析及其应用

基本信息

批准号：
17019049
负责人：
木梨陽康
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ランカマイシン生合成のスターターおよび水酸化機構を明らかにするため、重水素化イソロイシンの取り込みおよび2つのP450 hydroxylase遺伝子の破壊を行った。その結果、イソロイシンが2-methylbutyric acidに酸化されて取り込まれた後、15位の水酸化、続いて8位の水酸化が起こることが明らかになった。pSLA2-L上にコードされた多くの制御遺伝子の機能を明らかにするため、様々な遺伝子破壊株を作製しphenotypeを調べた。その結果、afsA homologueであるsrrX(orf85)が関与するγ-butyrolactone(GB)はランカサイジンおよびランカマイシン生産を正に、胞子形成を負に制御することが分かった。GBリセプターSrrA(Orf82)はGBとは全く逆に作用し、もう一つのTetR型リセプターSrrC(Orf74)は胞子形成を正に制御し、抗生物質生産には影響を与えなかった。一方、srrB(orf79)の破壊株は両抗生物質を大量生産し、胞子も正常に形成した。さらに、SARP遺伝子srrY(orf75)の破壊株は抗生物質も胞子も作らなくなった。このような極めて複雑な制御カスケードの全貌を明らかにするため、転写解析を含めて総合的な解析を行っている。S.scabiesはジャガイモそうか病を引き起こすが、それにはthaxtomin生合成遺伝子txtABに加えてnec1,tomAなどの遺伝子が関与している。これらの遺伝子はpathogenic islandを形成して他の菌株に転移する。PFGEを用いて解析したところ、イランで採取したS3,S7株から約200kbの巨大線状プラスミドが見つかった。後者のプラスミドを接合によってS.lividansに転移させたところ病原性を獲得した。標準株からも線状プラスミドが見つかり、その病原性への関与が強く示唆された。

Raw water acidification mechanism P450 Hydroxylase is the product of hydroxylase.そのRESULT, イソロイシンが2-methylbutyric The acid is acidified and the water is acidified at the 15th position. pSLA2-L has a functional function and a phenotype of pSLA2-L.そのRESULT,afsA homologueであるsrrX(orf85)が关与するγ-butyrolactone(G B) The はランカサイジンおよびランカマイシンをpositiveに, the spores are formed and the negativeにcontrolすることが分かった. GBリセプターSrrA(Orf82)はGBとは全く inverse actionし、もう一つのTetR typeリセプターSrrC (Orf74) has a direct control on spore formation and a positive influence on antibiotic production. On the one hand, the broken strain of srrB (orf79) has not been mass-produced with antibiotics, and the spores have been formed normally.さらに、SARP legacy srrY(orf75)の波壊 strains and antibiotics spores are made by らなくなった.このような极めてFU雑なcontrolled カスケードの full view を明らかにするため、転写analytic を有めて総合的なanalytic を行っている. S.scabiesはジャガイモそうか diseaseをinducedき出こすが、それにはthaxtomi nborn synthesizes the remaining 伝子 txtABに加えてnec1, tomAなどの缝子が关与している.これらの缝子はpathogenic islandをformationしてhisのstrainに転动する. PFGE is used to analyze and analyze the S3 and S7 strains, and to analyze the large linear linear S3 and S7 strains of about 200kb. The latter's のプラスミドをjoint によってS.lividans に転movable させたところpathogenic をgets した. The standard strains are linear プラスミドが见つかり, そのpathogenic への关 and がstrong く Show された.