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綿状プラスミドpSLA2-Lにコードされた二次代謝遺伝子群の機能解析とその応用

絮状质粒pSLA2-L编码的次级代谢基因的功能分析及其应用

基本信息

批准号：
18018028
负责人：
木梨陽康
金额：
$ 4.67万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)二次代謝制御カスケードの解析線状プラスミドpSLA2-L上にコードされた多くの制御遺伝子によって構成される制御カスケードの詳細な解析を行った。SrrA蛋白の結合領域を検索し、srrX,srrY,srrWの3つの制御遺伝子のpromoter領域を取得した。gel retardationによってSrrAとsrrYの結合を確かめ、foot printingによってsrrYのプロモーター領域にSrrAの結合サイトを同定した。そこには26-bpのパリンドローム配列が見つかり、ArpAを初めとするr-butyrolactone(GB)リセプター蛋白の結合配列とよく似ていた。野生株のGB画分はSrrAのsrrYプロモーターへの結合を乖離させたが、△srrX変異株の画分は活性がなく、またリガンド結合に必須なTrp残基をAlaに代えたArp^<W119A>はGBを添加しても乖離しなかった。こうして、srrX→srrA→srrYの中心的なシグナル伝達経路を分子レベルで証明した。(2)ランカサイジンの生合成機構の解析ランカサイジン隼合成(lkc)クラスターをlkcA-EとlkcF-Oの2つに分け、前者をS.lividansの染色体に組み込み、後者をプラスミド上にのせて導入した株はランカサイジノールAを生産した。この結果は、lkcクラスターが骨格合成に必要な全ての遺伝子を含むことを示した。私たちは先にランカサイジンのモジュラー・反復混合生合成仮説を提唱したが、lkcAは骨格形成を開始するNRPS-PKS融合遺伝子であり、lkcGは伸長反応を終結する遺伝子なので、繰り返し反応の候補から除外できる。lkcF-G融合株を作製したところ親株と同量のLCを生産したので、lkcFも候補から除かれた。その結果、消去法によって、lkcCが4回繰り返して縮合反応することが示唆された。(3)pSLA2-Mの全塩基配列決寅と胞子形成機構の解析pSLA2-Mのコスミド・ライブラリーを作製し、両末端は別個にクローン化して、全ての領域をカバーするクローンを得た。これらのクローンを用いてpSLA2-Mの全塩基配列を決定中であり、両末端には352bpの末端逆位配列(TlR)が見つかった。しかし、両者の相同性は91%と低かったので、左右のTlR間に相同組み換えによるhomogenizationが起きていないことが示唆された。

(1)The analysis of the linear structure of the secondary metabolic system is carried out on pSL2-L. SrrA protein binding domain is detected, srrX,srrY,srrW and 3 regulatory promoter domains are obtained. Gel retraction, foot printing, SrrA, SrrY, SrrA, SrrY The 26-bp protein binding sequence is similar to that of ArpA and r-butyrolactone(GB). The wild plants were isolated from the SrrA and SrrX plants by the addition of Trp residues to Ala and Arp<W119A>. srrX→ srrA→srrY The center of srrX →srrY (2)The analysis and synthesis mechanism of S. lividans genome is divided into two parts: S. lividans genome and S. lividans genome, and S.lividans genome and S.lividans genome is divided into two parts: S.lividans genome and S.lividans genome. The result is that the synthesis of bone cells is necessary to complete the synthesis of bone cells. In addition, the NRPS-PKS fusion gene, lkcA, and lkcG, which begin to form a skeleton, terminate the NRPS-PKS fusion gene, and terminate the NRPS-PKS fusion gene, lkcA, and lkcG, which are candidates for the formation of a skeleton. LkcF-G fusion plants are produced in the same amount as their parents, and LkcF-G fusion plants are produced in the same amount. As a result, the elimination method, lkcC, 4 cycles of condensation and condensation are shown. (3) pSLA2-M's all-base alignment and analysis of cell formation mechanisms pSLA2-M's terminal alignment and cell formation mechanisms were analyzed. The 352bp terminal reverse alignment (TlR) of pSLA2-M was determined in this study. The identity of the two groups is 91%, and the identity of the two groups is 91%.