ジテルペン配糖体をツールとする細胞内信号伝達経路の解析と制御

以二萜糖苷为工具分析和控制细胞内信号转导通路

• 批准号: 17035051
• 负责人: 加藤 修雄
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17035051/
• 关键词: 細胞内信号伝達; ジテルペン配糖体; コチレニン; 14-3-3タンパク質; isoform選択性; クロスリンク; 細胞分化誘導活性

H^+-ATPaseは14-3-3タンパク質の会合によって活性化される。ジテルペン配糖体コチレニン(CN)は、この会合状態を安定化することで、強力な植物ホルモン様活性を示す。14-3-3タンパク質が細胞内信号伝達系を制御しているので、CNは、細胞内信号伝達経路の解析と制御に極めて有用なツールとなり得る。我々は、CN糖鎖上のエポキシドが急性骨髄性白血病細胞(HL-60)に対する分化誘導活性を増強することを見出している。このことは、CNが14-3-3タンパク質と共有結合を形成し、そのペプチド捕捉能を増強しているためと推定した。ヒト14-3-3には、7種のisoformが知られるが、それらのペプチドおよびCN結合サイト周辺にエポキシドと反応可能なCysteinはsigma isoformにのみ存在する。そこで、【CNは14-3-3 sigmaに共有結合し、そのペプチド捕捉能を増強する】との仮説を立て、その実証研究を遂行した。14-3-3 sigmaを大腸菌によって発現・取得し、実際にCNとクロスリンクすることをSDS-PAGEおよびMALDI-TOF Mass測定により確認した。結合溝近傍にCysteinを持たないzeta isoformは何ら変化せず、この反応はsigma isoform選択的である。さらに、CN修飾14-3-3 sigmaがH^+-ATPaseペプチドに対する捕捉能を保持していることを、等温滴定カロリメトリーで評価し、非修飾の場合に3.4μMである解離定数が、修飾体で0.022μMと著しく減少し、CNによる修飾が14-3-3 sigmaのペプチド捕捉能を増強していることを立証した。14-3-3タンパク質のisoformの詳細な役割は全く未解明であり、CN修飾sigma isoformは、その機能解明ツールとして極めて有効である。

H^+-ATPaseは14-3-3タンパク性の合によってactivationされる. Tetraglycoside Glycoside (CN), この rendezvous state を stabilization することで, strong な plant ホルモン様 active をshow. 14-3-3 タンパク性が Intracellular signal 伝达行しているので、CNは、Intracellular signal 伝达経路のANALYSIS とControl に Extremely useful なツールとなり得る. I am 々は, CN sugar-locked acute bone marrow leukemia cells (HL-60) have differentiated inducing activity and have been shown to be strong and strong.このことは, CNが14-3-3 タンパク性とShared bonding をformation し, そのペプチドCapture ability をincrease strength しているためと presumed した.ヒト14-3-3 には、7 kinds of のisoform が知られるが、それらのペプチドおよびCN Combined with サイトzhou辺にエポキシドとReaction PossibleなCysteinはsigma isoform にのみexistent する.そこで、【CNは14-3-3 sigmaにshared combinationし、そのペプチドCapture abilityを嗗强する】との仮说を立て、その実 Evidence Researchを行した. 14-3-3 sigma を coliform によって発appear・obtain し、実记 CNとクロスリンクすることをSDS-PAGEおよびMALDI-TOF Mass measurement is done and confirmed. Combined with the ditch near Cystein をhold た な zeta isoform は ら変化 せ ず, こ の 応 は sigma isoform selection 択 で あ る.さらに、CN modification 14-3-3 sigma がH^+-ATPase ペプチドに対するCapture and maintain していることを, Isothermal titration カロリメトリーでvaluation価し, In the case of non-modification, the dissociation constant is 3.4μM, the modification is 0.022μM, the dissociation constant is reduced, and the CN modification is 14-3-3 Sigma's ability to capture and strengthen its capabilities is proven. 14-3-3タンパク性のisoformのDetailsな service cutは全く无码不明であり, CN modified sigma isoformは, その function clarified ツールとして extremely めてeffective である.