Rap1/RAPLによる抗原提示細胞DCの免疫監視調節機構の解明

Rap1/RAPL阐明抗原呈递DC的免疫监视调节机制

• 批准号: 17047019
• 负责人: 片桐 晃子
• 金额: $ 5.38万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17047019/
• 关键词: Rapl; RAPL; STK; TCR; chemokine; LFA-1; ICAM-1; activation; Rap1; Adhesion; proliferation; inflammation; autoimmune; lymphoma; DC

1)目的RAPLを欠損するマウスでは、加齢すると自己免疫疾患及びB cell lymphomaを発症する。RAPLが増殖応答を制御している可能性を検討した。2)方法及び結果RAPL欠損マウスでは、8-12mnth oldで、脾腫とともに自己免疫性の糸球体腎炎を発症することが分かった。T及びB細胞数の増加が認められ、CD44+CD62L-のeffector/memory T cellの割合の増加及びCD138+のPlasma cellの増加も認められた。また、12 montholdで30%以上のマウスでmature B cellタイプのLymphomaが発症することがわかった。IgHの再構成をSouthern blotで検討し、monoclonalであることが確かめられた。そこで、RAPL欠損丁及びB細胞のTCR及びBCR刺激による増殖反応を3H-Thymidineの取込みを調べるとともに、BrdU/7AAD染色によってcell cycle解析を行ったところ、RAPL欠損リンパ球は正常リンパ球に比べ、Sphaseへの移行が1.5〜2倍程度亢進していることが判明した。この原因を追求するため、まずearly signalついて、Erk及びIκBαのリン酸化を指標に検討したが、亢進は認められなかった。G1からS期への移行に関与するCyclinD/Eの発現にも違いは認められなかった。in vitroで、Cdk4の活性をRb-GST、Cdk2の活性をHistoneを基質として検討したところ、Cdk4の活性には差が認められなかったが、Cdk2のkinase活性が2倍程度R紐L欠損T及びBリンパ球では亢進していることが明らかとなった。3)考察RAPLは、TCR及びBCR刺激によるリンパ球の増殖反応の抑制分子として重要な働きをしており、その欠如は自己免疫病発症につながることが示唆された。

1）目的：在缺乏RAPL的小鼠中，衰老会引起自身免疫性疾病和B细胞淋巴瘤。我们研究了RAPL控制增殖反应的可能性。 2）方法和结果发现Rapl缺陷小鼠在8-12mnth年龄较大的脾肿大中出现了自身免疫性肾小球肾炎。观察到T和B细胞的数量增加，并且还观察到CD44+ CD62L-的效应子/记忆T细胞比率增加，并且还观察到CD138+的血浆细胞增加。还发现，成熟的B细胞型淋巴瘤在12个月时在30％或更多的小鼠中出现。在南部印迹中检查了IGH的重建，并被确认为单克隆。因此，我们通过TCR和BCR刺激研究了RAPL缺陷标本和B细胞的增殖反应，并使用BRDU/7AAD染色进行了细胞周期分析，并发现RAPL缺陷型淋巴细胞比正常淋巴细胞高于SPHASE的1.5-2倍。为了研究这一原因，首先使用ERK和IκBα的磷酸化作为指标对早期信号进行检查，但没有观察到增强的活性。在循环/e的表达中没有观察到差异，这与从G1到S相的过渡有关。在体外，我们使用RB-GST和CDK2使用组蛋白作为底物研究了CDK4的活性，尽管在CDK4的活性中没有发现差异，但据揭示CDK2的激酶活性在R-String L-缺乏型T和Byphemphocytes中增加了约两倍。 3）讨论RAPL作为分子起着重要的作用，该分子通过刺激TCR和BCR抑制淋巴细胞的增殖反应，并且建议其缺乏导致自身免疫性疾病的发展。