权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

圧力を用いた分子体積プロファイル解析による蛋白質立体構造形成過程での水分子の寄与

使用基于压力的分子体积剖面分析水分子对蛋白质 3D 结构形成过程的贡献

基本信息

批准号：
18031001
负责人：
石森浩一郎
金额：
$ 8.32万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の研究実績の概要は以下のとおりである。1.疎水性アミノ酸残基からの脱水和の分子体積に対する寄与: 疎水性部位からの脱水和による部分分子体積減少の実験的確証を得るため、Cyt cの蛋白質表面に位置する親水性のAsp93を疎水性のLeuに置換し、この変異による立体構造形成に伴う体積変化を追跡した。その結果、この変異により、その立体構造形成による体積の減少量は、約5mLmol^<-1>程度増加した。2.高圧下時分割蛍光観測システムの構築疎水性アミノ酸残基からの脱水和の分子体積に対する寄与: 蛋白質の立体構造形成機構を考える上で重要な遷移状態における水分子の挙動を解明するためには、活性化体積ΔV^≠を見積もる必要がある。従来、Cyt cでは、このΔV^≠を見積もるため、種々の圧力下におけるヘムの紫外可視吸収を利用してきたが、この手法では蛋白質部分の構造変化が直接には反映されない。そこで、立体構造形成により、ヘムに近接することでその蛍光強度が減少するTrpの蛍光に注目し、蛋白質部分の変化を直接観察することを試みた。高圧下での立体構造形成反応の追跡については、還元型CytcのCO結合体が非結合体に比べその安定性が低く、レーザー光照射によるヘム鉄からCO分子の解離より、立体構造形成反応が開始可能であることを利用した。その結果、高濃度の塩酸グアニジン存在下のCO結合還元型Cyt cや、COが結合しない酸化型Cyt cでは光照射により、有意な蛍光変化は観測されないが、3.6M塩酸グアニジン存在下のCO結合還元型型Cyt cでは光照射に伴い、蛍光強度の低下が観測された。これはCOの解離によって立体構造形成反応が進行したと考えられ、本装置を用いて種々の圧力下における蛋白質立体構造形成反応をその蛍光変化により、追跡できることが示された。現状では観測される蛍光の強度が弱いが、集光レンズの装着などにより、その強度を上げることで、再現性の良い定量的な測定が期待できる。

An overview of this year's research achievements is as follows. 1. Confirmation of dehydration and reduction of molecular volume of aqueous aqueous acid residues and reduction of molecular volume. Send to: Confirmation of dehydration and reduction of partial molecular volume of aqueous acid residues, Cyt The position of the c protein surface is the hydrophilic Asp93, the aqueous Leu is replaced, and the three-dimensional structure is formed and the volume is changed and the trace is traced. As a result, the volume of the three-dimensional structure is reduced, and the volume is increased to about 5mLmol^<-1>. 2. Under high pressure, the structure of the aqueous acid residues and the molecular volume of the aqueous acid residues were dehydrated and the molecular volume was measured. The three-dimensional structure forming mechanism of the protein is important and the migration state of the water molecule is clear and the activation volume ΔV^≠ is necessary. Come, Cyt cでは、このΔV^≠を见区もるため、kind of 々のpressure under pressure UV visible absorption The structural modification of the protein part is directly reflected in the structure of the protein part using the technique of してきたが and この.そこで, three-dimensional structure formation により, ヘムに close proximity することでその蛍が light intensity reduction するTrp の蛍光にAttentionし、Protein part の変化をDirect observation することをtestみた. The three-dimensional structure under high pressure forms a reactive tracking system, and the reduced Cytc CO combined body and non-conjugated body are less stable than the non-conjugated body.く, レーザーLight irradiation can cause the dissociation of CO molecules and the formation of three-dimensional structures, and the reaction can begin, and it is possible to use it.その results, CO combined with reduced Cyt cや in the presence of high concentration of acidic acid, CO combined with acidified Cyt cではLight irradiationにより、Intentionalな蛍Photoconversionは観measurementされないが、CO binding reduction type Cyt in the presence of 3.6M chloric acid グアニジンThe c-light irradiation is accompanied by the detection of low light intensity. The dissociation of CO and the three-dimensional structure formation reaction are carried out and the device is used. Under pressure, the three-dimensional structure of the における protein forms a reflection をその蛍光剉化により, and a trace できることがshows された. Current situation: では観measurement: される荍のStrength: がweak いが, Collect light: レンズの装などにより, the strength is high, the reproducibility is good, and the quantitative measurement is expected.