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リンパ球マイクロアレイを用いた免疫機能の診断・治療システムの開発

淋巴细胞微阵列免疫功能诊疗系统的开发

基本信息

批准号：
18048019
负责人：
村口篤
金额：
$ 3.52万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18048019/
关键词：
感染症抗体医薬細胞チップ抗体遺伝子リコンビナント抗体

项目摘要

本研究で以下の研究成果を得た。1.抗原特異的Bリンパ球の自動検出法の検討を行った。リンパ球マイクロウエルアレイの検出方法の条件をさらに検討し、利用率、検出感度、再現性の向上を図った。特に、リンパ球チップの利用率が現在5%前後であり、低頻度の抗原特異的Bリンパ球検出系の課題となっているので、利用率が10%以上の新しいチップを開発した。さらにCCDカメラを用いた新しいスキャナーを改良し、1秒間隔で細胞内Ca濃度の測定を可能とした。2.リンパ球チップを用いた病原体特異的Bリンパ球の検出、抗体遺伝子のクローニング、リコンビナント抗体の作成を行った。HBsワクチン接種でHBs抗原陽性の健常人をボランティアとし、リンパ球マイクロウェルアレイを用いてHBs抗原特異的Bリンパ球の同定および抗体遺伝子解析を行った。HBs特異的抗体遺伝子のV領域配列をヒトIgGのC領域配列と結合させた発現型ベクターを構築し動物細胞株(293T)に導入し、リコンビナント抗体を得た。現在抗体に結合する20個以上のヒトリコンビナント抗体を取得している。3.リンパ球チップの応用として抗体産生細胞の検出を試みた。免疫したマウスの脾細胞あるいほHBsワクチン接種によりHBs抗原陽性の健常人ボランティアの末梢血のBリンパ球を、抗原をコートしたリンパ球チップに1個づつ播種し、特異的抗体産生細胞の検出をFLISPOT法で行った。この検出系の確立により、抗原特異的抗体のmRNAを大量に発現すう1個の交代産生細胞を得ることが可能となり、リコンビナントの作成が画期的に容易になった。

The following research results were obtained. 1. The automatic detection method of antigen specific B protein was discussed. The conditions of detection method of fine ball are discussed in detail, utilization rate, detection sensitivity and reproducibility. In particular, the utilization rate of antigen-specific B proteins is now around 5%, and the development of new antigen-specific B proteins with a utilization rate of more than 10%. The measurement of intracellular Ca concentration is possible at 1-second intervals. 2. Pathogen specific B protein detection, antibody gene detection, and antibody production. HBs vaccination, HBs antigen-positive healthy people, HBs antigen-specific B antigen identification and antibody gene analysis V-domain alignment of HBs-specific antibody fragments, C-domain alignment of IgG, binding and expression of HBs-specific antibody fragments, construction of animal cell lines (293T), introduction of HBs-specific antibody fragments and generation of HBs-specific antibody fragments. More than 20 antibodies are now available for binding. 3. The detection of antibody-producing cells in mice Immunization of spleen cells with HBs antigen positive healthy individuals was performed by FLISPOT method. The expression of antigen-specific antibody mRNA in a large number of cells is easy to establish and produce.