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細胞チップを用いた抗原特異的T細胞の迅速・高効率な検出・作製法の開発

利用细胞芯片开发抗原特异性T细胞的快速高效检测和生产方法

基本信息

批准号：
11F01415
负责人：
村口篤
金额：
$ 1.15万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、がんの免疫療法が注目を集めているが、治療の有効性を評価するよいシステムがないことが問題となっている。本研究では、金らが確立した画期的なリンパ球マイクロチップ法(Jin A. et al., Nature Medicine ; 15 : 1088-1092, 2009)を応用し、がん特異的T細胞を迅速にかつ高精度で検出し、癌特異的T細胞を迅速に作製することができる基盤技術を開発することを目的としている。これまでに、抗原特異性が既知のTCRトランスジェニックマウスのT細胞を用い、細胞チップ上で抗原ペプチドで刺激することにより、抗原ペプチド刺激特異的なT細胞のサイトカイン産生を検出できることを示してきた。平成25年度は、この結果を踏まえ、ヒトのT細胞を用い、細胞チップ上で抗原特異的T細胞が検出できるかを検討した。抗原として、ほとんどの日本人が不顕性感染しているEBウイルスのペプチドを用いた。まず、ドナーの末梢血リンパ球をEBウイルスペプチドで刺激し、フローサイトメータを用いて解析し、EBウイルスペプチドに反応しサイトカインを産生するリンパ球が存在するかを確認した。次に、EBウイルスペプチドに反応するリンパ球を含むリンパ球を細胞チップに播種し、1個1個の細胞をマイクロウェルに格納した。チップにEBウイルスペプチドを添加し、細胞を刺激したところ、6時間後に、EBウイルスペプチド刺激特異的にサイトカインを産生する細胞を検出することができた。抗原刺激特異的にサイトカインを産生したT細胞を1個ずつ回収し、回収したリンパ球より、TCR c DNAをRT-PCRにて増幅した。TCRの配列を解析した結果、EBウイルスの特異的なTCRが取得されたことを確認した。以上より、細胞チップを用いることで、抗原に特異的なTリンパ球を、短時間に、非常に高感度に検出できることを示すことができた。今後、この技術をがん免疫治療の効果の評価、及び、がん免疫治療に有効なTCRの取得に応用したい。

In recent years, the immunization method has focused on the prevention and treatment of health problems. In this study, Jin A. et al., Nature Medicine (15: 1088-1092, 2009) was used to determine the accuracy of the whole process, the T cells of the cancer cells were used rapidly, the T cells of the cancer patients were used rapidly, and the cancer cells were used rapidly. It is known that the antigen is specific and specific to the TCR. It is known that the T cell is activated by the antigen, the antigen is stimulated by the antigen, and the antigen is stimulated by the antigen. The results of the year 25 in Pingcheng showed that the T cells were infected with antigen specific T cells. Antigens, Japanese, Japanese and Japanese. The EB, the peripheral blood, the stimulation, the analysis, the EB, the health, the presence of the ball, the presence of the ball. For the second time and EB, there are two kinds of equipment, one for each cell, one for each cell, and one for each cell. After 6: 00 a. M., the EB was activated and the cell was stimulated. After 6: 00 am, the EB was activated. After 6: 00 a. M., the cell was activated. The antigen stimulated the target cells to generate one cell cycle, one RT-PCR cell cycle, and one RT-PCR cell cycle. The TCR configuration parses the results of the results, and the TCR of the EB attribute gets a confirmation of the results. The above sensors and cell phones are used to display the temperature response by using a sensitive, antigen-specific, short-term, and very high-sensitivity device. In the future, the technology of immunotherapy has improved the results of immunotherapy, and the TCR of immunotherapy has been successfully used.