ヒト免疫細胞の発生分化に関する分子生物学的研究

人体免疫细胞发育和分化的分子生物学研究

• 批准号: 06265212
• 负责人: 村口 篤
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06265212/
• 关键词: リンパ球前駆細胞株; ストローマ細胞株; RAG-1遺伝子; サイトカイン; RAG-1ゲノム構造; プロモーター; 転写調節因子

(1)ヒト胎児肝より、未分化型リンパ球表面マーカー(CD2,CD19)を有し、胚型TCR遺伝子および胚型Ig遺伝子構造をもち、かつRAG遺伝子を発現していないクローン化リンパ球前駆細胞株(FL8.2.4.4)を樹立した。(2)FL8.2.4.4細胞とマウス骨髄由来ストローマ細胞株PA-6の共培養の実験系を用いて、(1)PA-6との共培養のみではFL8.2.4.4にRAGの発現は誘導されないこと、(2)種々の混合サイトカイン(IL-2,IL-3,IL-6,IL-7,GM-CSF,SCF)存在下で培養すると、FL8.2.4.4細胞に12時間以内にRAGの発現が誘導されること、(3)個々のサイトカインについては、IL-3,IL-6,IL-7がRAGの発現誘導に関与し、これらのサイトカインの間に相乗効果が認められること、(4)RAGの発現誘導にFL8.2.4.4細胞とPA-6接着が必須であること、(5)FL8.2.4.4細胞をパラホルムアルデヒドで固定したPA-6細胞と共培養してもFL8.2.4.4にRAGの発現が誘導されることを明らかにした。(3)ヒトゲノムライブラリーから、RAG-1cDNAを用いてRAG-1ゲノム遺伝子をクローニングし、その構造を解析した。その結果、(1)RAG-1は約4kbのイントロンをはさむ2つのエクソンからなること、(2)RAG-1はTdT遺伝子やmb-1遺伝子と同様のnon-TATA遺伝子構造であること、(3)複数(少なくとも4箇所)の転写開始点を持つこと、(4)塩基配列が決定されたプロモーター領域(580bp)に、Ets-1,Lyf-1,Ig-enhancer box,GATA,NF-IL6などの転写調節蛋白の結合配列が存在することを明らかにした。ゲルシフト法等により、どのような転写因子がどの領域に決定するかを現在明らかにしつつある。

(1)The cell line FL8.2.4.4 was established for the development of embryonic TCR gene and embryonic Ig gene structures. (2) The co-culture of FL8.2.4.4 cell line PA-6 was induced by RAG,(1) The co-culture of PA-6 was induced by RAG,(2) The co-culture of PA-6 was induced by RAG.(IL-2,IL-3,IL-6,IL-7,GM-CSF,SCF) in the presence of culture medium, FL8.2.4.4 cells within 12 hours of RAG induction,(3) in the presence of medium, IL-3,IL-6,IL-7 RAG induction, and (3) in the presence of medium.(4) Induction of RAG expression in FL8.2.4.4 cells and PA-6 cells must be followed;(5) Induction of RAG expression in FL8.2.4.4 cells must be followed by fixation of PA-6 cells. (3)RAG-1 cDNA was used to analyze the structure of RAG-1 cDNA. The results are as follows: (1)RAG-1 is about 4kb in length;(2)RAG-1 is about 4kb in length;(3) RAG-1 is about 4kb in length;(4)RAG-1 is about 4kb in length;(5) RAG-1 is about 4kb in length;(6) RAG-1 is about 4kb in length;(7)RAG-1 is about 4kb in length;(8) RAG-1 is about 4kb in length;(9) RAG-1 is about 4kb;(9) RAG-1 is (4) The binding sequence of Ets-1,Lyf-1,Ig-enhancer box,GATA, NF-IL6 and the binding regulatory protein is determined in the domain (580bp). The law of the land, the law of the land.