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ヒトリンパ球の発生分化における組み換え活性化遺伝子の発現調節機構の解析

人淋巴细胞发育分化过程中重组激活基因表达调控机制分析

基本信息

批准号：
06807032
负责人：
村口篤
金额：
--
依托单位：
Toyama Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ヒト胎児肝から得られた単核球をEBウイルスで形質転換することにより、未分化型リンパ球表面マーカー(CD2,CD19)を有し、胚型TCRおよび胚型Ig遺伝子構造を有し、かつ未だRAG遺伝子を発現していないクローン化リンパ球前駆細胞株(FL8.2.4.4)を樹立した。2.FL8.2.4.4細胞とマウス骨髄由来ストローマ細胞株PA-6の共培養の実験系を用いて以下のことを明らかにした。(1)PA-6との共培養のみではFL8.2.4.4にRAGの発現は誘導されない。(2)種々の混合サイトカイン(IL-2,IL-3,IL-6,IL-7,GM-CSF,SCF)存在下で培養すると、FL8.2.4.4細胞に12時間以内にRAGの発現が誘導される。(3)個々のサイトカインについては、IL-3,IL-6,IL-7がRAGの発現誘導に関与し、これらのサイトカインの間に相乗効果が認められる。(4)RAGの発現誘導にFL8.2.4.4細胞とPA-6の接着が必須である。(5)FL8.2.4.4細胞をパラホルムアルデヒドで固定したPA-6細胞と共培養してもFL8.2.4.4にRAGの発現が誘導される。3.ヒトゲノムライブラリーから、RAG-1cDNAを用いてRAG-1ゲノム遺伝子をクローニングし、その構造を解析し以下のことを明らかにした。(1)RAG-1は約4kbのイントロンをはさむ2つのエクソンからなる。(2)RAG-1はTdT遺伝子やmb-1遺伝子と同様のnon-TATA遺伝子構造である。(3)RAG-1は複数(少なくとも4箇所)の転写開始点を持つ。(4)塩基配列が決定されたプロモーター領域(580bp)に、Ets-1,Lyf-1,Ig-enhancer box,GATA,NF-IL6などの転写調節蛋白の結合配列が存在する。

1. The embryonic TCR gene and the embryonic Ig gene structure were found in the embryonic TCR gene and the embryonic Ig gene. The embryonic TCR gene and the embryonic Ig gene were found in the embryonic TCR gene and the embryonic Ig gene. 2. FL8.2.4.4 cell line PA-6 co-culture system (1)PA-6 and RAG co-culture were induced in FL8.2.4.4. (2)RAG was induced in FL8.2.4.4 cells cultured in the presence of a mixture of IL-2,IL-3,IL-6,IL-7,GM-CSF and SCF within 12 hours. (3)IL-3,IL-6 and IL-7 are closely related to the induction of RAG. (4)RAG induction in FL8.2.4.4 cells and PA-6 induction in FL8.2.4.4 cells. (5)FL8.2.4.4 cells were immobilized and co-cultured with PA-6 cells, and RAG expression was induced in FL8.2.4.4 cells. 3. RAG-1 cDNA was used in the analysis of RAG-1 cDNA, and the structure of RAG-1 cDNA was analyzed. (1)RAG-1 is about 4kb long. (2)RAG-1 is a TdT gene and mb-1 gene. (3)RAG-1 is complex (less than 4 places) and the writing start point is held. (4)The binding sequence of Ets-1,Lyf-1,Ig-enhancer box,GATA, NF-IL6 and other regulatory proteins in the domain (580bp) determined by gene alignment exists.