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開口放出で働く繋留因子Exocyst複合体の立体構造解析

在胞吐作用中发挥作用的束缚因子 Exocyst 复合物的三维结构分析

基本信息

批准号：
18054009
负责人：
深井周也
金额：
$ 4.03万
依托单位：
The University of Tokyo (2007)Tokyo Institute of Technology (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

生体試料から調製したExocyst複合体やサブ複合体はサブユニット構成が不明であり、現段階では単粒子解析による立体像の決定は難しい。しかし、組み換えタンパク質を用いて再構成した複合体の像との比較によって、生体試料から得られた像の解釈が可能になると考えられる。バキュロウイルスの発現系を用いて複合体の再構成を行うべく、組み換えベクターの構築を進めた。今年度は、ラットの4つのサブユニット、ショウジョウバエの7つのサブユニットをバクミド組換え用のベクターに組込み終えた。Exocystの構造解析を進めると共に、研究分担者の京大医・堀内久徳講師との共同研究によりExocyst複合体とRalとの相互作用が血小板の顆粒放出を制御していることを新たに示した。また、Ralの新規結合タンパク質の同定・解析も進めた。出芽酵母のExocyst複合体は、Sec15pサブユニットを介して、酵母のRab GTPase Sec4pとその活性化タンパク質であるグアニンヌクレオチド交換因子(GEF)Sec2pと相互作用する。我々は、まず、Sec2pのGEFドメインの結晶構造を3.0Å分解能で決定し、GEF反応が180Åの長さの単純なコイルドコイル構造によって行われることを明らかにした。さらに、欠失変異体や点変異体を使った結合アッセイおよびGEFアッセイにより、Sec4p結合サイトと結合に必要なアミノ酸残基を特定した。GEFドメイン単独の結晶構造と生化学的解析の結果に基づいて発現系を設計し、Sec2pのGEFドメインとSec4pの複合体の結晶構造を2.7Å分解能で決定し、ヌクレオチドの解離を促進させるSec4pのスイッチ領域の大きな構造変化が複合体形成によって引き起こされる仕組みを原子分解能レベルで明らかにした。

The composition of biological samples is unknown, and the determination of stereo images is difficult at the present stage. Comparison of the images of the reconstructed complexes with the samples obtained from biological samples The development system of the complex is used to reconstruct the complex. This year, the company has 4 sets of service providers, 7 sets of service providers, and 7 sets of service providers. Exocyst structure analysis and research co-author Professor Hisanori Horiuchi of Kyoto University for joint research on Exocyst complex and Ral interaction for platelet particle release control The new rules of Ral and Ral are combined with the new rules of Ral and Ral. The Exocyst complex of budding yeast is mediated by Sec15p, which interacts with the Rab GTPase Sec4p of yeast and the active protein of the yeast. The crystal structure of GEF with a length of 3.0 nm can be determined by the decomposition energy of GEF with a length of 180 nm. In addition to the above, we also need to specify the acid residues necessary for the binding of these proteins to GEF. As a result of the analysis of the crystal structure and biochemistry of GEF, the basic structure of the reaction system was designed, and the crystal structure of the complex of Sec 2p and Sec4p was determined by the decomposition energy of Sec 2p and Sec4p, and the dissociation of Sec 2p and Sec4p was promoted by the decomposition energy of Sec4p.

项目成果

期刊论文数量（16）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Rhoによって制御される細胞質中のForminタンパク質によるアクチン重合

由 Rho 控制的细胞质中的 Formin 蛋白进行肌动蛋白聚合

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
東智仁;ほか
通讯作者：
ほか

Purification, crystallization and preliminary X-ray diffraction of SecDF, a translocon-associated membrane protein, from Thermus thermophilus

DOI：
10.1107/s1744309106007779
发表时间：
2006-04-01
期刊：
ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION F-STRUCTURAL BIOLOGY COMMUNICATIONS
影响因子：
0.9
作者：
Tsukazaki, T;Mori, H;Ito, K
通讯作者：
Ito, K

Crystallization and crystallographic analysis of yeast Sec2p, a guanine nucleotide-exchange factor for the yeast Rab GTPase Sec4p.

DOI：
10.1107/s1744309107027121
发表时间：
2007-07
期刊：
Acta crystallographica. Section F, Structural biology and crystallization communications
影响因子：
0
作者：
Yusuke Sato;S. Fukai;O. Nureki
通讯作者：
Yusuke Sato;S. Fukai;O. Nureki

Structural basis of RNA-dependent recruitment of glutamine to the genetic code