開口放出で働く繋留因子Exocyst複合体の立体構造解析

在胞吐作用中发挥作用的束缚因子 Exocyst 复合物的三维结构分析

• 批准号: 18054009
• 负责人: 深井 周也
• 金额: $ 4.03万
• 依托单位: The University of Tokyo (2007)Tokyo Institute of Technology (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18054009/
• 关键词: X線結晶構造解析; 電子顕微鏡; 超分子複合体; 小胞輸送; 低分子量GTPase; 開口放出; 膜融合

生体試料から調製したExocyst複合体やサブ複合体はサブユニット構成が不明であり、現段階では単粒子解析による立体像の決定は難しい。しかし、組み換えタンパク質を用いて再構成した複合体の像との比較によって、生体試料から得られた像の解釈が可能になると考えられる。バキュロウイルスの発現系を用いて複合体の再構成を行うべく、組み換えベクターの構築を進めた。今年度は、ラットの4つのサブユニット、ショウジョウバエの7つのサブユニットをバクミド組換え用のベクターに組込み終えた。Exocystの構造解析を進めると共に、研究分担者の京大医・堀内久徳講師との共同研究によりExocyst複合体とRalとの相互作用が血小板の顆粒放出を制御していることを新たに示した。また、Ralの新規結合タンパク質の同定・解析も進めた。出芽酵母のExocyst複合体は、Sec15pサブユニットを介して、酵母のRab GTPase Sec4pとその活性化タンパク質であるグアニンヌクレオチド交換因子(GEF)Sec2pと相互作用する。我々は、まず、Sec2pのGEFドメインの結晶構造を3.0Å分解能で決定し、GEF反応が180Åの長さの単純なコイルドコイル構造によって行われることを明らかにした。さらに、欠失変異体や点変異体を使った結合アッセイおよびGEFアッセイにより、Sec4p結合サイトと結合に必要なアミノ酸残基を特定した。GEFドメイン単独の結晶構造と生化学的解析の結果に基づいて発現系を設計し、Sec2pのGEFドメインとSec4pの複合体の結晶構造を2.7Å分解能で決定し、ヌクレオチドの解離を促進させるSec4pのスイッチ領域の大きな構造変化が複合体形成によって引き起こされる仕組みを原子分解能レベルで明らかにした。

The raw material, the Exocyst complex, the complex, the unknown, the segment, the particle analysis, the stereo image, the decision. The clones and tissues are used to form a complex, which is better than that of raw materials, and it is possible to understand the results. In the first place, the system is used to make a copy of the gene, and then make it into a line, and then make a copy of it. For the current year, we need to learn more about this year. This year, we need to learn more about this year. This year, we will use the information system to make sure that we are in a better position. During the Exocyst analysis, the researcher, Dr. Horiuchi of Peking University, worked together to study the Exocyst complex, Ral interaction, platelet granule release, and to control the production of platelet granules. The combination of the new rules and regulations of Ral and the new rules and regulations of the United States are subject to the same resolution. The budding yeast "Exocyst complex", Sec15p yeast "GEF", yeast "Rab GTPase Sec4p"activation", yeast "cross factor" Sec2p "interaction". We do not know how to determine the resolution of GEF. In addition, we do not know how to determine the resolution of the data. It is necessary to combine the acid residues and acid residues with the combination of GEF and Sec4p, which is necessary for the combination of molecular weight, missing body temperature, temperature and temperature. The analytical results of GEF single crystal analysis of biochemistry showed that the decomposition energy of the complex was determined by the design of the basic computer system and the complex of the Sec2p GEFI Sec4p complex. The method of dissociation promotes the formation of a complex in the field of Sec4p. The formation of a complex has led to the formation of atomic decomposition energy.

项目成果

Rhoによって制御される細胞質中のForminタンパク質によるアクチン重合

由 Rho 控制的细胞质中的 Formin 蛋白进行肌动蛋白聚合

• 发表时间: 2007
• 作者: 東 智仁;ほか
• 通讯作者: ほか

Purification, crystallization and preliminary X-ray diffraction of SecDF, a translocon-associated membrane protein, from Thermus thermophilus

• DOI: 10.1107/s1744309106007779
• 发表时间: 2006-04-01
• 期刊: ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION F-STRUCTURAL BIOLOGY COMMUNICATIONS
• 影响因子: 0.9
• 作者: Tsukazaki, T;Mori, H;Ito, K
• 通讯作者: Ito, K

Crystallization and crystallographic analysis of yeast Sec2p, a guanine nucleotide-exchange factor for the yeast Rab GTPase Sec4p.

• DOI: 10.1107/s1744309107027121
• 发表时间: 2007-07
• 期刊: Acta crystallographica. Section F, Structural biology and crystallization communications
• 作者: Yusuke Sato;S. Fukai;O. Nureki

Structural basis of RNA-dependent recruitment of glutamine to the genetic code

• DOI: 10.1126/science.1128470
• 发表时间: 2006-06-30
• 期刊: SCIENCE
• 影响因子: 56.9
• 作者: Oshikane, Hiroyuki;Sheppard, Kelly;Nureki, Osamu
• 通讯作者: Nureki, Osamu

Asymmetric coiled-coil structure with Guanine nucleotide exchange activity.

• DOI: 10.1016/j.str.2007.01.003
• 发表时间: 2007-02
• 期刊: Structure
• 影响因子: 5.7
• 作者: Yusuke Sato;R. Shirakawa;H. Horiuchi;N. Dohmae;S. Fukai;O. Nureki