ABCトランスポータ(CFTR)の成熟化・分解・形質膜移行を制御する分子複合体

控制 ABC 转运蛋白 (CFTR) 成熟、降解和质膜易位的分子复合物

基本信息

批准号：
18059025
负责人：
杉田誠
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18059025/
关键词：
CFTR 嚢胞性線維症シヤペロン ABCトランスポータシャペロン

项目摘要

CFTRは嚢胞性腺維症の原因遺伝子であり、508番目のフェニルアラニンを欠損する変異型CFTRを有する患者においては、細胎内のERでCFTRが異常分解され、結果として粘膜上皮細胞の腺腔側細胞膜にCFTR Cr-チャネルが存在しないために疾患が誘発される。本研究においては、CFTRに結合する分子複合体がいかに機能しCFTRの生成と分解を制御するか、その分子基盤を解明することを目的とした。Yeast two-hybri dsystemにより従来検出したCFTR R ドメインに接着する遺伝子ファミリー(the CFTR R-domain InteractingProtein(CRIP):CRIPl ・ CRIP2 ・ CRIP3)は、相同性が高くZinc Ring Fingerを有するC末端領域でCFTR Rドメインに結合し、中央部でシャペロン分子Hsc70と結合する。内在性にCFTRを発現するヒト唾液腺由来培養細胞(HSG細胞)、において、作製した抗体を用い内在性のCRIPsの発現量を比較すると、CRIP1とCRIP3に比較しCRIP2の発現量が多く観察された。CRIPlとCRIP3は成熟型CFTRの生成をそれぞれ促進的および抑制的に制御するが、CRIP2に関してはsiRNAを用いて内在性CRIP2の発現量を低下させた際および遺伝子導入によりCRIP2を過剰発現させた際の双方において、成熟型CFTRの生成は促進され、現時点でその分子機能を明らかにで貪ていない。完全長のCRIP1 ・ CRIP2 ・ CRIP3は核内もしくは核周囲領域に存在するが、ALLN感受性プロテアーゼにより切断修飾され、Zinc Ring Fingerを含みCFTRのRドメインに対する結合能を有するCRIPのC末端領域が細胞質に一過的に移行することが観察された。特に切断修飾されたCRIP3は細胞質に顕著に存在した。Zinc Ring Finger を介してCFTEのRドメインに結合するCRIP1 ・ CRIP2 ・ CRIP3は、切断修飾を受け細胞内局在を変化させながら、Hsc70を含む分子シャペロン複合体の中で、もしくはそれらとは独立して、成熟型CFtR生成を桔抗的および相補的に制御することが示唆された。

CFTR是囊性纤维化的致病基因，对于在508位的突变CFTR缺乏苯丙氨酸缺乏的患者中，CFTR在胎儿ER内的ER中异常降解，导致没有CFTR CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CR-CRANDILULALULAN CARBINE CAVINE CARBRANE MEMBRANE ERBRANE EPBRANE ECASALILIAL EPICASALIALILILILILILILILILILILILILILILILILILILILILILILILIAL。在这项研究中，目的是阐明如何与CFTR功能结合并调节CFTR的形成和降解的分子基础。先前由酵母两个杂交系统检测到的基因家族（CRIPL，CRIP）（CRIPL，CRIP2，CRIP3）与C-termolation的CFTR R结构域结合，具有高同源性和锌环手指的CFTR R结构域，并与中心区域中的分子蛋白分子HSC70结合。当使用内源性表达CFTR的人类唾液腺衍生的培养细胞（HSG细胞）中比较内源性CRIP的表达水平时，观察到CRIP2的表达水平高于CRIP1和CRIP3的表达水平。 CRIPL和CRIP3分别促进和压抑调节成熟CFTR的产生，但是对于CRIP2，当使用siRNA降低内源性CRIP2的表达水平并且CRIP2通过基因转移过度表达CRIP2时，成熟CFTR的产生既可以促进，又可以促进其分子函数，并且其分子功能不明显并且不存在。尽管全长CRIP1，CRIP2和CRIP3存在于细胞核或核周区域中，但观察到CRIP的C末端区域被全敏感性蛋白酶切割和修饰，并且包含锌环手指，并且具有与CFTR的R域结合，转移到cytoplaplamm上。特别是，裂解修饰的CRIP3在细胞质中显着存在。已经提出，通过锌环，抗和互补控制与CFTE结合的CRIP1，CRIP2和CRIP3在HSC70或独立于HSC70中结合了CFTE的R结构域，同时进行了切割修饰并改变了细胞亚细胞定位。