カルネキシンをターゲットにした遺伝性嚢胞性線維症の新規治療法の開発

开发针对钙联蛋白的遗传性囊性纤维化新疗法

• 批准号: 11153220
• 负责人: 甲斐 広文
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11153220/
• 关键词: 嚢胞性線維症; 分子シャペロン; calnexin; CFTR

嚢胞性線維症(cystic fibrosis:CF)は,白色人種の間で最も頻度の高い常染色体劣性遺伝性疾患である.CF患者の約70%は,508番目のフェニルアラニンの欠損変異(ΔF508CFTR)である.この変異蛋白質はフォールディングが不完全であるために,小胞体の分子シャペロンであるcalnexin(CNX)から解離できず,小胞体に保持される.その結果,CFTRは形質膜上に発現することができない.そこで,本研究では我々が最近見い出したcalnexin isoform(iCNX)を用いた新しい遺伝子治療法について検討した.この治療法の原理は,iCNXによりCNXからΔF508CFTRの解離を促し,チャネル機能は正常なΔF508CFTRを形質膜上に発現させるというものである.まず,導入したiCNXの局在を調べるために,GFP-iCNX融合蛋白質および免疫蛍光染色法を用いて検討したところ,iCNXは小胞体内に局在することがわかった.次に,iCNXを高発現する組換えアデノウイルスを用いてCFTRのmaturationについて,Westernblotting法およびpulse-chase法を行い検討した結果,iCNXはCFTRの発現量を増加させ,さらにΔF508CFTRの小胞体保持からの解離を促すことがわかった.さらに,ΔF508CFTRが形質膜上に移行し,機能しているか否かについて125 I efflux法を用いて検討したところ,iCNX導入細胞においてCFTRが機能していることが確認された.

Cellular fibrosis (CF) is the most frequent autosomal genetic disorder among white people. About 70% of CF patients are deficient in CF (ΔF508CFTR). The protein is not completely dissociated, and the molecule of the cell is dissociated from calnexin(CNX), and the cell is maintained. As a result,CFTR appeared on the plasma membrane. This study was conducted using a new method called calnexin isoform(iCNX). The principle of this therapy is that iCNX is not only the dissociation of ΔF508CFTR, but also the normal function of ΔF508CFTR. The fusion protein GFP-iCNX and immunoluminescence staining method were used to detect the presence of iCNX in vivo. In addition,iCNX has been investigated by Western blotting method and pulse-chase method. As a result,iCNX has increased the amount of CFTR detection, and the dissociation of ΔF508CFTR cells has been promoted. In addition,ΔF508CFTR was transferred to the plasma membrane, and its function was confirmed by 125 I efflux method.

项目成果

S.Nagayama: "Characterization of CFTR expression in a human pulmonary mucoepidermoid carcinoma cell line,NCIH292 cells"FEBS Letter. 455. 215-218 (1999)

S.Nagayama：“人肺粘液表皮样癌细胞系 NCIH292 细胞中 CFTR 表达的表征”FEBS Letter。

S.Tai: "Effect of deoxyribonuclease 1 on tracheal mucociliary transport and airway secretion in anaesthetized quails"Pharmacol.Rev.Commun.. 10. 257-264 (1999)

S.Tai：“脱氧核糖核酸酶 1 对麻醉鹌鹑气管粘液纤毛运输和气道分泌的影响”Pharmacol.Rev.Commun.. 10. 257-264 (1999)

H.Kai: "MEF up-regulates lysozyme transcription in epithelial cells."J.Biol.Chem.. 274. 20098-20102 (1999)

H.Kai：“MEF 上调上皮细胞中的溶菌酶转录。”J.Biol.Chem.. 274. 20098-20102 (1999)

M. Okumura: "effects of eosinophil-granule major basic protein on phosphatidylcholine secretion in rat type II pneumocytes"Am. J. Physiol.. 276. 763-768 (1999)

M. Okumura：“嗜酸性粒细胞颗粒主要碱性蛋白对大鼠 II 型肺细胞磷脂酰胆碱分泌的影响”Am。