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高分解能蛍光顕微鏡法によるカルシウムスイッチングの動的観察

使用高分辨率荧光显微镜动态观察钙转换

基本信息

批准号：
19037023
负责人：
若林健之
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

骨格筋・心筋の収縮は細いフィラメントへのカルシウム・イオンの結合で制御されており、その標的タンパク質はトロポニンである。これまで, トロポニンの三者複合体のNMR分光を行い、トロポニンにはモバイル・ドメインの原子構造を解くことに成功し, この構造情報から筋弛緩の際のアクチン・トロポニン結合の原子モデルを構築した。このモデルによれば, トロポニンがトロポミオシンを押すことによって, アクチンのミオシン結合部位を覆うことが, 弛緩の分子メカニズムである。そこで, 本研究ではカルシウムがトロポニンに結合・解離する際のトロポニンおよびトロポミオシンの動きを動的に観察することを目的とした。まずトロポミオシンを大腸菌で大量発現・精製する方法を確立した。次いで、トロポミオシン全体にわたってほぼ均等に7箇所にシステイン残基を導入することに成功した。東北大学樋口研の協力の下でQドットアビジンを結合させてその動きを観察した。ケージドEGTAの紫外線照射によりカルシウムの濃度を下げると, Qドット蛍光は移動したように見えたが、紫外線照射の際の振動などのアーテファクトである可能性もあるので慎重に実験を繰り返す必要がある。またアクチンフィラメントがしっかりとガラス基板に結合できていない可能性も検討している。導入したシステインをビオチン化し、Qドット標識アビジンを結合させようとしたところ、その結合効率は、システインを導入した部位に依存して大きく異なるという予想外の結果も得た。

The bones and tendons of the heart, heart and heart. The three clones were cloned into NMR, and then the atoms were made to solve the problem. The results showed that the solution was successful. Please tell me that the bonding part of the joint is covered with a thin layer, and that the molecules are broken down. In this study, the purpose of this study is to monitor the purpose of this study. This study is based on the purpose of this study. Please tell me that a large number of bacteria can be found in a large number of methods. This is the first time that the residue has been added to the list of successful candidates. Under the cooperation of oral research and cooperation of Peking University, we combined with the students of Beijing University to observe the situation. It is possible to use the EGTA radiation under the ultraviolet ray, and the Q-ray light to move the infrared radiation and the ultraviolet ray to the ultraviolet ray. The possibility that the ultraviolet ray is irradiated by the ultraviolet ray should be carefully checked. This is due to the fact that the substrate is in combination with the possibility that it is not possible. In this way, you can learn how to improve the performance of your computer. In this way, you can use the combination of information, information, etc.

项目成果

期刊论文数量（7）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

トロボミオシン・ジャンクションのスイベルはアクチンフィラメント制御に必須である

肌球蛋白连接旋转对于肌动蛋白丝的调节至关重要

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
村上健次;M.;Stewart;若林健之
通讯作者：
若林健之

Tropomyosinbinding Motifs of Actin

肌动蛋白的原肌球蛋白结合基序

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
K. Murakami;T. Yasunaga;& T. Wakabavashi
通讯作者：
& T. Wakabavashi

Structural basis for Ca^<2+>-regulated muscle relaxation of striated muscles at interaction sites of troponin with actin and tropomyosin.

Ca^2调节肌钙蛋白与肌动蛋白和原肌球蛋白相互作用位点的横纹肌肌肉松弛的结构基础。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Adv. Exp. Med. Biol. 592
影响因子：
0
作者：
K.;Murakami・F.;Yumoto・S.;Ohki・T.;Yasunaga・M.;Tanokura・T.;Wakabayashi
通讯作者：
Wakabayashi

Evaluation of a 2k CCD camera with an epitaxially-grown CsI scintillator for recording energyfiltered electron cryomicrographs

评估带有外延生长 CsI 闪烁体的 2k CCD 相机，用于记录能量过滤电子冷冻显微照片

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
J Electron Microsc. (Yokyo) 57
影响因子：
0
作者：
有森貴夫;紙谷浩之;玉置春彦;中村照也;池水信二;石橋徹;原島秀吉;関口睦夫;山縣ゆり子;T. Yasunaga & T. Wakabayashi
通讯作者：
T. Yasunaga & T. Wakabayashi

Evaluation of a 2k CCD camera with an epitaxially-grown CsI scintillator for recording energyfiltered electron crvomicrogranhs

使用外延生长的 CsI 闪烁体记录能量过滤电子显微镜的 2k CCD 相机的评估

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
J Electron Microsc. (Tokyo) 57
影响因子：
0
作者：
K. Murakami;M. Stewart;K. Nozawa;K. Tomii;N. Kudou;N. Igarashi;Y. Shira kihara;S. Wakatsuki;T. Yasunaga;& T. Wakabayashi;Tomoyuki Mori;T. Yasunaga & T. Wakabayashi
通讯作者：
T. Yasunaga & T. Wakabayashi