高分解能蛍光顕微鏡法によるカルシウムスイッチングの動的観察

使用高分辨率荧光显微镜动态观察钙转换

• 批准号: 19037023
• 负责人: 若林 健之
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19037023/
• 关键词: トロポミオシン; トロポニン; カルシウム; アクチン; 筋肉収縮; 収縮制御; 骨格筋; 心筋; トロボニン; トロボミオシン; 筋収縮; ミオシン; 一分子; 蛍光標識

骨格筋・心筋の収縮は細いフィラメントへのカルシウム・イオンの結合で制御されており、その標的タンパク質はトロポニンである。これまで, トロポニンの三者複合体のNMR分光を行い、トロポニンにはモバイル・ドメインの原子構造を解くことに成功し, この構造情報から筋弛緩の際のアクチン・トロポニン結合の原子モデルを構築した。このモデルによれば, トロポニンがトロポミオシンを押すことによって, アクチンのミオシン結合部位を覆うことが, 弛緩の分子メカニズムである。そこで, 本研究ではカルシウムがトロポニンに結合・解離する際のトロポニンおよびトロポミオシンの動きを動的に観察することを目的とした。まずトロポミオシンを大腸菌で大量発現・精製する方法を確立した。次いで、トロポミオシン全体にわたってほぼ均等に7箇所にシステイン残基を導入することに成功した。東北大学樋口研の協力の下でQドットアビジンを結合させてその動きを観察した。ケージドEGTAの紫外線照射によりカルシウムの濃度を下げると, Qドット蛍光は移動したように見えたが、紫外線照射の際の振動などのアーテファクトである可能性もあるので慎重に実験を繰り返す必要がある。またアクチンフィラメントがしっかりとガラス基板に結合できていない可能性も検討している。導入したシステインをビオチン化し、Qドット標識アビジンを結合させようとしたところ、その結合効率は、システインを導入した部位に依存して大きく異なるという予想外の結果も得た。

The structure of the bone, heart and tendon is very small, and the combination of the bone, heart and tendon is very small. The NMR spectroscopy of the three-component complex of the three components was successfully carried out, and the atomic structure of the complex was successfully solved. The structural information of the complex was successfully constructed. The structure of the structure of the structure is composed of the following parts: This study aims to investigate the relationship between the two groups. A method for the production and purification of Escherichia coli was established. All seven residues were successfully introduced into the system. Tohoku University's Research Institute's cooperation with the United States The concentration of ultraviolet radiation in EGTA decreases, and the light shifts. The vibration during ultraviolet radiation decreases, and the possibility of vibration decreases. The possibility of bonding to a substrate is discussed. The result of the test is:

项目成果

トロボミオシン・ジャンクションのスイベルはアクチンフィラメント制御に必須である

肌球蛋白连接旋转对于肌动蛋白丝的调节至关重要

• 发表时间: 2007
• 作者: 村上健次;M.;Stewart;若林 健之
• 通讯作者: 若林 健之

Tropomyosinbinding Motifs of Actin

肌动蛋白的原肌球蛋白结合基序

• 发表时间: 2008
• 作者: K. Murakami;T. Yasunaga;& T. Wakabavashi
• 通讯作者: & T. Wakabavashi

Structural basis for Ca^<2+>-regulated muscle relaxation of striated muscles at interaction sites of troponin with actin and tropomyosin.

Ca^2调节肌钙蛋白与肌动蛋白和原肌球蛋白相互作用位点的横纹肌肌肉松弛的结构基础。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Adv. Exp. Med. Biol. 592
• 作者: K.;Murakami・F.;Yumoto・S.;Ohki・T.;Yasunaga・M.;Tanokura・T.;Wakabayashi
• 通讯作者: Wakabayashi

Evaluation of a 2k CCD camera with an epitaxially-grown CsI scintillator for recording energyfiltered electron cryomicrographs

评估带有外延生长 CsI 闪烁体的 2k CCD 相机，用于记录能量过滤电子冷冻显微照片

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Electron Microsc. (Yokyo) 57
• 作者: 有森貴夫;紙谷浩之;玉置春彦;中村照也;池水信二;石橋徹;原島秀吉;関口睦夫;山縣ゆり子;T. Yasunaga & T. Wakabayashi
• 通讯作者: T. Yasunaga & T. Wakabayashi

Evaluation of a 2k CCD camera with an epitaxially-grown CsI scintillator for recording energyfiltered electron crvomicrogranhs

使用外延生长的 CsI 闪烁体记录能量过滤电子显微镜的 2k CCD 相机的评估

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Electron Microsc. (Tokyo) 57
• 作者: K. Murakami;M. Stewart;K. Nozawa;K. Tomii;N. Kudou;N. Igarashi;Y. Shira kihara;S. Wakatsuki;T. Yasunaga;& T. Wakabayashi;Tomoyuki Mori;T. Yasunaga & T. Wakabayashi
• 通讯作者: T. Yasunaga & T. Wakabayashi