細胞質スプライシングにおけるRNA動態-Rlg1上でのtRNAとmRNAの邂逅

细胞质剪接中的 RNA 动力学 - tRNA 和 mRNA 在 Rlg1 上的相遇

• 批准号: 19038009
• 负责人: 吉久 徹
• 金额: $ 5.31万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19038009/
• 关键词: 核酸; 細胞生物学; 細胞質スプライシング; 細胞内局在; 微生物; tRNA; 小胞体ストレス応答

本年度は、出芽酵母の小胞体ストレス応答(UPR)で非典型的細胞質スプライシングを受けるHAC1 mRNAとRNPを形成することがわかった酵母tRNA ligase Rlg1pの遺伝学的解析を中心に研究を進め、さらに組換えRlg1pを用いたin vitroでの解析へと展開を図った。まず、tRNA ligaseの持つ、tRNAのスプライシング酵素としての機能、HAC1 mRNAのスプライシング酵素としての機能、そして、HAC1 mRNAの翻訳制御因子としての機能が個別に異常となった変異が単離できるかを検討した。多数の温度感受性rlg1およびUPR欠損rlg1を単離・解析した結果、上記の3つのいずれかの機能にだけ欠損を示す変異をそれぞれ単離することができた。特にtRNAのスプライシングに欠損を示すrlg1変異には、単にligation反応が進まない結果としてエキソンが蓄積する変異だけでなく、イントロンを含んだ前駆体も蓄積するもの、さらには、切断されたイントロンも蓄積するものが得られ、Rlg1pがtRNAのスプライシングの複数の局面に必要とされる可能性が示された。また、UPR欠損変異には、明らかにHAC1 mRNAのスプライシングが低下しているものと、そこそのHAC1^i mRNAが生じているにも関わらず、Hac1^iタンパク質の合成できない変異が存在した。これは、Rlg1pが翻訳制御に特異的に働くドメインを持つことを示唆している。さらに、Rlg1p組換え体を用いたin vitroのpull down実験によって、Rlg1pがIre1pで切断される前のHAC1^u mRNAを直接結合することが確認できた。以上のことから、Rlg1pはtRNAやHAC1 mRNAとRNPを形成しつつ、そのスプライシングおよび翻訳制御に直接関わることが明らかとなった。

This year, the center for the analysis of yeast tRNA ligase Rlg1p gene has been conducting research on the formation of HAC1 mRNA and RNP in the cytoplasm of untypical budding yeast microsomes (UPR), and the use of Rlg1p in vitro analysis. The function of tRNA ligase, tRNA gene expression enzyme, HAC1 mRNA gene expression enzyme, and HAC1 mRNA gene expression control factor are discussed. Most of the temperature sensitivity rlg1 and UPR deficiency rlg1 are separated from each other by analysis results, and the above three functions are separated from each other by analysis results. In particular, it is necessary to indicate the possibility of a situation in which the tRNA gene is not present in the rlg1 gene but in which the tRNA gene is present in the rlg1 gene. The expression of HAC1 mRNA was significantly lower than that of HAC1 mRNA, and the expression of HAC1 mRNA was significantly lower than that of HAC1 mRNA. Rlg1p is a special kind of control system. Rlg1p is used in vitro pulldown and HAC1^u mRNA is directly bound to Rlg1p and Ire1p. Rlg1p is the first to express HAC1 mRNA and RNP directly. It is the first to express HAC1 mRNA and RNP directly.

项目成果

Dynamics of tRNA in the cell and the genome - New aspects of classical"non-coding RNA"-

tRNA在细胞和基因组中的动态-经典“非编码RNA”的新方面-

• 发表时间: 2009
• 作者: 吉久徹;高野晃;遠藤斗志也;Tohru Yoshihisa
• 通讯作者: Tohru Yoshihisa

酵母におけるtRNAの動態-細胞質スプライシングとスプライシング因子の新機能

酵母中的tRNA动力学——细胞质剪接和剪接因子的新特征

• 发表时间: 2007
• 作者: 吉久徹;他9名
• 通讯作者: 他9名

生化学辞典第4版、「ミトコンドリアリボソームRNA」項など

生物化学词典第4版“线粒体核糖体RNA”部分等

• 发表时间: 2007
• 作者: 吉久 徹;遠藤 斗志也;吉久 徹
• 通讯作者: 吉久 徹

tRNAのイントロンは出芽酵母に必要か

tRNA 内含子是酿酒酵母所必需的吗？

• 发表时间: 2008
• 作者: 森俊輔;遠藤斗志也;吉久徹
• 通讯作者: 吉久徹

Nuclear import of tRNA in yeast - Ssa2p, one of cytoplasmic Hsp70, involves in tRNA dynamics

酵母中 tRNA 的核输入 - Ssa2p（细胞质 Hsp70 之一）参与 tRNA 动力学

• 发表时间: 2008
• 作者: Akira Takano;… Toshiya Endo;Tohru Yoshihisa(計5名)
• 通讯作者: Tohru Yoshihisa(計5名)