核内に存在する成熱体tRNAの生理的意義の解析III

细胞核中存在的成体 tRNA 的生理意义分析 III

• 批准号: 17026015
• 负责人: 吉久 徹
• 金额: $ 3.52万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17026015/
• 关键词: 核酸; 微生物; 核; 細胞内局在化; tRNA; スプライシング

本年度は、核内の成熟体tRNAの生理的機能の解明と、tRNAの核内輸送の機構解明に向けて、核内輸送に関わる因子の同定を中心に研究を展開した。特に、遺伝学的にtRNAの核内輸送関連因子を探索する目的で、Δlos1 Δmsn5二重変異株の示す核への成熟体tRNAの蓄積を軽減する抑圧変異の単離、tRNA-Metの不安定化を引き起こすtRNAメチル化酵素遺伝子変異trm6-504とΔlos1変異とが示す合成致死性を抑圧する変異の単離を行った。この中で、前者のスクリーニングからΔlos1 Δmsn5株におけるtRNAの核内蓄積が低減する温度感受性変異株が2株、trm6-504 Δlos1合成致死性の抑圧変異株が4株取得できた。後者の4株の内にはΔlos1変異であるにもかかわらず、核内の成熟体tRNA-Pro量が明らかに野生型レベルまで下がっている株が3種含まれていることがFISH解析で明らかとなった。これらのことは、単離された変異株においてtRNA-Metの分解回避による生育の回復と、tRNAの核への輸送量の低下・核外への輸送の亢進に密接な関連があることを示唆している。現在、こうした表現型を引き起こす変異原遺伝子の同定を進め、tRNA分解とtRNAの核内輸送の関連について解析を進めている。さらに、本研究では、細胞内での新たなRNAの検出方法の検討を行い、RNAの3'末端の数塩基分の配列の違いを識別してその局在を観察できるOligonucleotide-directed 3'-terminal extension of RNA法(OTTER法)を開発した。この方法によって、tRNAのCCA末端の短縮化を引き起こすcca1-1変異株中において、正常なtRNAは細胞質に留まるが、3'末端の短縮化したtRNAが特異的に核内に運ばれることを明らかにした。

This year, we have begun to study the physiological function of mature tRNA in nucleus, the mechanism of tRNA transport in nucleus, and the identity of factors related to nuclear transport. To explore the factors involved in nuclear transport of tRNA in specific genes, Δlos1 Δmsn5 double variant showed that the accumulation of mature tRNA in nuclear DNA was reduced, the variation of tRNA-Met instability was induced, and the variation of tRNA enzyme gene trm6-504 and Δlos1 variant showed that the variation of synthetic lethality was inhibited. 5 strains of trRNA with low nuclear accumulation and temperature sensitivity were obtained, 2 strains of trm6 - 504 Δlos1 with synthetic lethality and 4 strains of trm6 -504 Δlos1 with synthetic lethality. 4 of the latter plants were found to be different from the wild type plants, and 3 of them were found to be different from the wild type plants by FISH analysis In this case, there is a close relationship between the breakdown and avoidance of tRNA-Met, the reproduction and recovery of tRNA, the decrease of nuclear transport and the increase of nuclear transport. Now, the phenotype of tRNA is introduced, the identity of tRNA is determined, and the relationship between tRNA decomposition and nuclear transport is analyzed. In this study, we have developed a novel method for detecting RNA in cells, and an Oligonucleode-directed 3'-terminal extension of RNA (OTTER) method for identifying RNA 3'-terminal sequences. This method involves shortening the CCA terminal of tRNA in cca1-1 mutant plants, and shortening the 3'terminal of tRNA in the cytoplasm of normal plants.

项目成果

tRNA, new aspects in intracellular dynamics

tRNA，细胞内动力学的新方面

• 发表时间: 2006
• 期刊: Cell. Mol. Life Sci 63
• 作者: T.Yoshihisa;C.Ohshima;K.Yunoki-Esaki;T.Endo;Tohru Yoshihisa
• 通讯作者: Tohru Yoshihisa

核内tRNAの生理的意義

核 tRNA 的生理意义

• 发表时间: 2006
• 期刊: 蛋白質核酸酵素PNE Vol.51 No.14
• 作者: 吉久徹;高野晃;遠藤斗志也
• 通讯作者: 遠藤斗志也

tRNAの成熟化と細胞内ダイナミクス-tRNAの一生における新展開

tRNA 成熟和细胞内动力学——tRNA 生命的新进展

• 发表时间: 2006
• 期刊: 蛋白質核酸酵素増刊「RNAと生命」 51
• 作者: 吉久徹;高野晃;遠藤斗志也;T.Yoshihisa;吉久徹
• 通讯作者: 吉久徹

Cytoplasmic splicing of tRNA in Saccharomyces cerevisiae

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2007.01056.x
• 发表时间: 2007-03
• 期刊: Genes to Cells
• 影响因子: 2.1
• 作者: T. Yoshihisa;C. Ohshima;Kaori Yunoki-Esaki;T. Endo

tRNA Actively Shuttles Between the Nucleus and Cytosol in Yeast

• DOI: 10.1126/science.1113346
• 发表时间: 2005-07
• 期刊: Science
• 影响因子: 56.9
• 作者: A. Takano;T. Endo;T. Yoshihisa