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HTLV-1の発がん機構における遺伝子編集酵素AIDの関与

基因编辑酶AID参与HTLV-1致癌机制

基本信息

批准号：
20012044
负责人：
森直樹
金额：
$ 6.78万
依托单位：
University of the Ryukyus
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20012044/
关键词：
HTLV-1 ATL AID NF-κB Bc1-3 Tax シグナル伝達発現制御

项目摘要

レトロウイルスであるヒトT細胞白血病ウイルス1型(HTLV-1)はCD4^+T細胞に感染後、長い潜伏期間を経て成人T細胞白血病(ATL)を引き起こす。HTLV-1がコードする調節遺伝子群の中でもtax遺伝子は、その多面的な細胞増殖促進作用、アポトーシス阻害作用、発がん促進作用から中心的な役割を果たすものと考えられている。一方、細胞ゲノムの不安定性の誘導はがん化に必須の基盤であり、Taxタンパク質も細胞のDNA修復機構の阻害と細胞周期のチェックポイント制御の逸脱を誘導することが知られているが、その詳細は不明である。AID (activation-induced cytidine deaminase)は、シチジン脱アミノ活性をもち、ヒトの免疫グロブリン遺伝子を改変する能力を有する遺伝子編集酵素である。これまでAIDは、活性化したBリンパ球でのみ発現し、生理的に機能しているものと考えられてきたが、最近の研究で抗体遺伝子だけでなく、その他の遺伝子にも変異を導入し、発がんとの関連が示唆されている。種々のヒトT細胞株において、HTLV-1感染Tax発現T細胞株にAID)の発現をmRNAおよびタンパク質レベルで認めた。末梢血PBMCには発現はみられなかったが、PHA刺激PBMCでは発現が誘導され、末梢血ATL白血病細胞においても10例全例でAIDの発現を認めた。一方、B-ALL6例中1例でAIDの発現がみられたが、T-ALL2例では全く発現がみられず、AIDの発現はATLに比較的特徴的であることを明らかにした。さらに、リンパ節や皮膚に浸潤したATL細胞の細胞質におけるAIDの発現を免疫染色で確認した。PBMCやCD4^+T細胞株へのHTLV-1の感染やTaxの発現誘導は、AIDの発現を誘導し、NF-κBやCREBの活性化がAIDの発現誘導には重要であった。AID遺伝子プロモーター上のTax応答領域の探索を行い、NF-κB配列を見出した。Tax誘導性JPX-9細胞やHTLV-1感染Tax発現T細胞株、ATL,細胞の核抽出液を用いたEMSAにて、この配列にp50のDNA結合が誘導される結果を得た。p50発現プラスミドはAIDのプロモーター活性を増強し、p50の遺伝子ノックダウンは感染T細胞株のAID発現を抑制したが、p65発現プラスミドやp65遺伝子ノックダウンはこのような結果を誘導しなかった。p50は転写活性化ドメインを持たないが、Bc1-3と会合することで、転写活性化機能を獲得する。HTLV-1感染T細胞株は選択的にBc1-3を発現しており、TaxはBc1-3発現を誘導した。Bc1-3とp50の結合がHTLV-1感染T細胞株で確認された。

T-cell leukemia type 1 (HTLV-1) begins with adult T-cell leukemia (ATL) after infection with CD4^+T cells and a long latency period. HTLV-1 has a multi-faceted effect of promoting cell proliferation, inhibiting cell proliferation, and promoting cell proliferation in the middle of the regulatory gene subgroup. The induction of instability in a cell cycle is an essential component of the DNA repair machinery in a cell cycle. The induction of instability in a cell cycle is unknown. AID (activation-induced cytidine deaminase) is an enzyme that regulates the activity of the enzyme and its ability to modify the immune response. This is the case with AID, activation of B molecules, discovery of physiological functions, and recent studies of antibody gene components, and other gene variants. The expression of AID mRNA in T cell lines infected with HTLV-1 and HTLV-1 was detected. The peripheral blood PBMC showed no signs of development, PHA-stimulated PBMC showed no signs of development, peripheral blood ATL leukemia cells showed no signs of development in all 10 cases. 1 case of AID and 2 cases of T-ALL were found completely, and the characteristics of AID and ATL were compared. The presence of AID in the cytoplasm of ATL cells was confirmed by immunostaining. PBMC and CD4 +T cell lines are important for the induction of HTLV-1 infection, Tax development, AID development, and activation of NF-κB and CREB. The study of Tax response field in AID gene transfer and NF-κB alignment were also discussed. Tax-inducible JPX-9 cells and HTLV-1 infected Tax-developed T cell lines, ATL, and nuclear extracts from cells were induced by EMSA and p50 DNA binding. The p50 gene expression increases the AID activity, the p50 gene expression suppresses the AID activity of infected T cell lines, and the p65 gene expression increases the AID activity of infected T cell lines. p50 is able to activate the function of Bc1 - 3 and Bc1 -3. HTLV-1 infected T cell line Bc1 -3 expression and Tax Bc1 -3 expression The binding of Bc1 -3 to p50 was confirmed in HTLV-1 infected T cell lines.