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ヒトC-fos遺伝子転写におけるトポイソメラーゼ, I, IIの機能の解析

拓扑异构酶I和II在人C-fos基因转录中的功能分析

基本信息

批准号：
62620503
负责人：
野瀬清
金额：
$ 0.96万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-62620503/
关键词：
C-yos クロマチントポイソメラーゼ転写誘導

项目摘要

C-fos遺伝子転写は, C-キナーゼ活性化により誘導される. この誘導の際のC-fos遺伝子構造について検討を加えた.活性クロマチンの指標の一つであるヌクレアーゼ感受性に関しては, C-fos遺伝子5′上流に4ヵ所のDNaseI感受性部位が検出された. この部位および感受性は, 誘導の前後で変化しなかった.U93Z細胞をTPAで処理するとC-fos転写誘導が起こるが, この誘導はトポイソトラーゼ阻害剤の1ホビオシン, カンプトテシンにより抑制された. 従って, C-fos誘導にはトポイソメラーゼによるDNAのコンホメーション変化が必須と考えられた. そこで, 細胞内C-fos遺伝子上のトポイソメラーゼ作用点を解折した. この作用点は, 細胞から抽出した高分子DNAを制限酵素で切断し, アルカリ性アガローズ電気泳動後サザンプロットして検出したその結果, C-fos遺伝子5′上流に3ヵ所のトポイソメラーゼによるDNA鎖切断が見られ, このうち2ヵ所はスクレアーゼ感受性部位と一致したが, C-fos誘導に伴う変化は見られなかった.以上の結果から, C-fos遺伝子は誘導前から活性化されたクロマチン構造をとり, トポイソメラーゼにより動的変化を受けていると考えられた. 従って, 発現誘導は遺伝子の5′上流に作用する転写因子により制御されることが主な調節機構となっいると考えられた. この点をクロランフェニコールアセチナルトランスフェラーゼ(CAT)遺伝子を用いて検討した. ヒトC-fos遺伝子の転写プロモーターを持つCAT遺伝子をL-細胞に導入し, C-fosプロモーターの異なった部分のDNAを同時に導入すると, -200付近のDNAによりCAT活性が上昇した. この結果はC-fos転写プロモーターには抑制的に動く因子が結合し, この因子の不活化が誘導の主な要因であることを示唆している.

C-fos gene is written in reverse, C-fos gene is activated in reverse. C-fos gene structure is the key to the induction of C-fos gene. The activity index of DNase I was detected in the 5′ upstream of C-fos gene. U93Z cells were treated with TPA, C-fos was induced, and the induction of C-fos was inhibited by TPA. The C-fos gene must be detected by DNA sequencing. The intracellular C-fos gene is located in the cell. The site of action is the DNA restriction enzyme that is extracted from the cell. As a result, C-fos gene 5′ upstream 3 ′ upstream 3 ′ downstream DNA restriction enzyme is cut off, and C-fos induction is accompanied by DNA restriction enzyme. The above results show that C-fos gene is activated before induction. The 5′ up-stream action of the induction gene is induced by the presence of a factor that controls the main regulatory mechanism. This is the first time that a CAT has been used to detect a virus. C-fos gene was introduced into L-cells simultaneously with CAT gene expression, and CAT activity increased by-200 bp of DNA. As a result, the C-fos gene expression is inhibited by the activation factor, and the inactivation factor is induced by the main factor.