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myc遺伝子産物による上皮細胞の形質転換とそれに伴う核骨格、細胞骨格の変化の解析

myc 基因产物对上皮细胞的转化及相关核骨架和细胞骨架变化的分析

基本信息

批准号：
61015024
负责人：
野瀬清
金额：
$ 1.73万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61015024/
关键词：
がん遺伝子形質転換 myc 上皮細胞増殖因子

项目摘要

放射線により試験管内形質転換したヒトセンイ芽細胞(CT-1)では、c-mycの発現が顕著に上昇していた。この細胞のc-myc遺伝子をクローン化し、構造を調べたが正常c-mycと同じであった。 CT-1細胞c-myc遺伝子のSmqIEcoRI断片をSV40またはマウスメタロチオネイン遺伝子の転写プロモーターに結合して発現可能なmyc組換体を作製した(pSV2CT-myc,pMKCTmyc)。-ネオマイシン耐性遺伝子と共に種々の培養細胞に導入し、細胞形質の変化を検討した。まずBalb/3T3細胞では、V-hasのみで低い頻度の形質転換が誘起されるが、pSV2CTmycを同時に導入すると形質転換の頻度が約5倍上昇し、形質転換細胞の形態がV-hasだけの場合とくらべ著しく紡錘形となった。しかし、mycだけでは形質転換しなかった。従ってc-mycの高発現はhasの機能と共役して細胞に作用し、恐らく細胞骨格のなかの微小管構造を変化させると考えられた。次に、マウス上皮細胞JB6,ラット上皮様細胞208Fおよびヒトセンイ芽細胞にpSV2CTmycを導入し、myc発現によるこれらの細胞の形質発現を検討した。 JB6 KMST-6では導入したmycの発現は見られたが、細胞形態は対照と全く差が認められなかった。しかし、208Fに導入した場合、mycの発現が高いクローンでは細胞形態の変化(上皮様から紡錘形)が見られた。抗アクチン抗体を用いた蛍光抗体法により、mycの発現は細胞骨格のミクロフィラメントの重合を変化させることが示された。さらに、208F細胞は上皮細胞増殖因子(EGF)により軟寒天内コロニーが形成されるがmycを導入したクローンではこのEGFに対する反応性が消失していた。この消失の機構は不明だが、少なくとも受容体の変化ではなく、刺激伝達系の変化と思われる。以上の変化とmyc発現との相関を直接的に証明するには発現量を調節するベクターを用いる必要がある。メタロチオネインプロモーターは効果が弱いことが判明した。

The appearance of c-myc in CT-1 cells was increased due to the change of shape and quality in the tube. The cell's c-myc gene is transformed and structurally modulated into a normal c-myc. SmqIEcoRI fragment of c-myc gene in CT-1 cell line SV40 (pSV2CT-myc,pMKCTmyc). - The introduction of the resistant gene into the cultured cells and the transformation of the cytoplasm In Balb/3T3 cells, V-has was induced at low frequency, and pSV2CTmyc was introduced at the same time. The frequency of V-has was increased by about 5 times, and the morphology of V-has was increased by 5 times.しかし、mycだけでは形质転换しなかった。C-myc has a high level of function and co-function, and the cellular structure has a high level of function and co-function. The expression of pSV2CTmyc and myc in JB6 and JB6 epithelial cells was investigated. JB6 KMST-6 is introduced into myc and cell morphology is changed. When 208F is introduced, myc is found to be high and cell morphology is changed (epithelium is spindle). Anti-virus antibodies were detected by light antibody method, and the development of myc was demonstrated by the combination of anti-virus and anti-virus antibodies. 208F cells are resistant to epidermal growth factor (EGF), which is introduced into the cells. The mechanism of disappearance is unknown, less obvious, the receptor is changed, and the stimulation system is changed. The above changes and myc occurrence are directly related to the proof, the occurrence amount is adjusted, and the application is necessary. The result of the test is that the test results are weak and the test results are clear