In vivo Bildgebung und transkriptionelle Regulation mophogenetischer Mechanismen in kardialen Vorläuferzellen während der Herzentwicklung

Stammzellen (Vorläuferzellen) besitzen die einzigartige Fähigkeit, interseits sich selbst zu nerneuern and undererseits in specizialisierte Tochterzellen zu differenzieren, um entscheidende Funktionen während der embryonalen organogenesis and der Gewebshomeostase zu steuern。再生Stammzelltherapien毛皮das赫兹erfordern静脉besser Verstandnis der molekularen Mechanismen,死das因为和死Differenzierung kardiovaskularer Progenitorzellen在内der embryonalen Entwicklung regulieren。[2]《人口统计》Vorläuferzellen。In der Embryogenese entsteht der linke Ventrikel aus derdersten Population, während der rechte Ventrikel, der Ausflußtrakt and große Teile der Vorhöfe durch die zweite Population von Zellen formert werden。Die wichtigsten zelllinen des Herzens，核合酶，glatte Muskelzellen and Endothelzellen, werden aus multipotentien kardiovaskulären Vorläuferzellen gebildet, Die Die transcriptionsfaktoren Isl1 and Nkx2-5 exprieren。[8] [9] [9] [9] [9] [9] [9] [9] [9] [9] [1] [3] [1] [1] [3] [1] [3] [1] [3] [1] [3] [1] [3] [1] [4] [4]形态学上的进化，在老鼠身上的进化，在老鼠身上的进化。Ziel unseres Projektes ist es daher, Signale zu identifizien, die (a) from the Schritte der Differenzierung and (b) Positionierung and Migration kardialer Vorläuferzellen in der Herzmorphogenese steuern。在verzentwicklung habeen， DNA芯片分析，kodierender和nicht-kodierender RNA， FACS-gereinigten kardiovaskulären Vorläuferzellen, neue Signalwege zu entdecken, die potentiell differenerung and Migration der progenoren während der Herzentwicklung koordinieren。(a) 4种microRNAs (miRNAs)，它们在祖先群体中被鉴定为具有特异性，而3 ' -UTRs则与Isl1、Nkx2.5和Gata4基因结合，特征一致。darber hinaus werden wir (b) die funktionelle Bedeutung von sphingosin 1-phosphat (S1P) Rezeptoren (S1PR) and S1P generierenden酶（Sphingosinkinasen, SphK） f<e:1>迁移和差异kardialer Vorläufer definieren. [j]。s1pr和SphKs在《儿童免疫贩运》中扮演了重要角色，并在《儿童免疫贩运》中扮演了重要角色Vorläuferzellen。[2] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1]Mit hilife - dier方法sollen die folgenden spezifischen Ziele des wissenschaftlichen程序erarbeitet werden: Ziel - 1野生mittel“实时成像”在Isl1- cre /R26R-YFP胚胎生理传输Isl1+ kardialer Vorläufer ber die Zeit （Embryonaltage 7.5 ~ 9.5）分析。Zusätzlich werden die迁移在isl1基因敲除中失败Mäusen untersut。Ziel - 2在体外鉴定了S1P信号机制中调控细胞分化和迁移的10个microrna。Ziel 3禽流感病毒在体内死亡的情况<e:1>细菌和细菌的感染情况：细菌和细菌的感染情况：有条件的细菌Überexpression有效的mirna bzw。胚胎发育过程中S1P信号通路的消融性研究[j]。植物生物学与再生生命[j] .植物生物学与再生生命。

Stammzellen (Vorläuferzellen) besitzen die einzigartige Fähigkeit, einerseits sich selbst zu erneuern und andererseits in spezialisierte Tochterzellen zu differenzieren, um entscheidende Funktionen während der embryonalen Organogenese und der Gewebshomeostase zu steuern. Regenerative Stammzelltherapien für das Herz erfordern ein besseres Verständnis der molekularen Mechanismen, die das Schicksal und die Differenzierung kardiovaskulärer Progenitorzellen während der embryonalen Entwicklung regulieren. Das Herz wird durch zwei Populationen von Vorläuferzellen gebildet. In der Embryogenese entsteht der linke Ventrikel aus der ersten Population, während der rechte Ventrikel, der Ausflußtrakt und große Teile der Vorhöfe durch die zweite Population von Zellen formiert werden. Die wichtigsten Zelllinien des Herzens, Kardiomyozyten, glatte Muskelzellen und Endothelzellen, werden aus multipotenten kardiovaskulären Vorläuferzellen gebildet, die die Transkriptionsfaktoren Isl1 und Nkx2-5 exprimieren. Für eine regelrechte Organentwicklung müssen die kardialen Progenitorzellen gezielt auf Signalkaskaden antworten, um zu expandieren, zu migrieren und sich letztlich in die drei-dimensionalen Herzstrukturen zu integrieren. Die Morphogenese dieser Prozesse, speziell in der Maus, ist bisher nicht ausreichend verstanden. Ziel unseres Projektes ist es daher, Signale zu identifizieren, die (a) frühe Schritte der Differenzierung und (b) Positionierung und Migration kardialer Vorläuferzellen in der Herzmorphogenese steuern. In vorbereitenden Arbeiten haben wir DNA Mikroarray-Analysen kodierender und nicht-kodierender RNA aus FACS-gereinigten kardiovaskulären Vorläuferzellen zu verschiedenen Entwicklungsstadien durchgeführt, um neue Signalwege zu entdecken, die potentiell Differenzierung und Migration der Progenitoren während der Herzentwicklung koordinieren. Basierend auf diesen Vorarbeiten wird das vorliegende Projekt die Modulation der Migration und Differenzierung kardialer Vorläufer (a) durch 4 microRNAs (miRNAs), die wir in der Progenitorpopulation identifiziert haben und an 3`-UTRs des Isl1, Nkx2.5 und Gata4 Gens binden, charakterisieren. Darüber hinaus werden wir (b) die funktionelle Bedeutung von Sphingosine 1-phosphat (S1P) Rezeptoren (S1PR) und S1P generierenden Enzymen (Sphingosinkinasen, SphK) für Migration und Differenzierung kardialer Vorläufer definieren. S1PRs und SphKs spielen eine wesentliche Rolle beim Trafficking von Immunzellen, und sind stark in sich entwickelnden kardialen Vorläuferzellen exprimiert. Mit Hilfe der intravitalen Multiphotonenmikroskopie (IVMP) und Zelllinientracking in Isl1-Cre/R26R-YFP Mausembryonen haben wir eine neue Methode etabliert, die uns die Visualisierung der Migration und Differenzierung individueller kardialer Progenitorzellen im sekundären Herzfeld erlaubt. Mit Hilfe dieser Methode sollen die folgenden spezifischen Ziele des wissenschaftlichen Prgramms erarbeitet werden: Ziel 1 wird mittels „live imaging“ in Isl1-Cre/R26R-YFP Embryonen das physiologische Trafficking Isl1+ kardialer Vorläufer über die Zeit (Embryonaltage 7.5 bis 9.5) analysieren. Zusätzlich werden die Migrationsdefekte in Isl1-knockout Mäusen untersucht. Ziel 2 wird die funktionelle Rolle der identifizierten miRNAs und der S1P Signalmaschinerie in der Regulation von Differenzierung und Migration kardialer Vorläufer in vitro charakterisieren. Ziel 3 wird diese Ergebnisse auf die in vivo Situation übertragen und mittels IVMP die Effekte einer konditionalen Überexpression der validierten miRNAs bzw. einer genetischen Ablation der S1P Signalkaskade in lebenden Embryonen studieren. Diese Arbeiten werden neue Erkenntnisse hinsichtlich molekularer Mechanismen kardialer Progenitorzellmigration und Differenzierung im Kontext kardiovaskulärer Stammzellbiologie und Regeneration liefern.