ニューロン及びグリア細胞における細胞特異蛋白遺伝子の転写制御機構の研究

神经元和胶质细胞细胞特异性蛋白基因转录调控机制研究

• 批准号: 63620505
• 负责人: 高橋 康夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63620505/
• 关键词: ニューロン; グリア細胞; 遺伝子; 転写; 制御因子蛋白; プロモーター; エンハンサー; ゲルシフト分析

中枢神経系細胞はニューロン、アストログリア、オリゴデンドログリアの3種類の細胞から構成されているが、その発生分化の機構は殆んど解明されていない。我々はニューロン特異蛋白としてニューロン特異エノラーゼ(NSE)、コレシストキニン(CCK)、アストログリア特異蛋白としてS-100β蛋白、オリゴデンドログリア特異蛋白として2^'、3^'環状ヌクレオチド水解酵素(CNP)について夫々の遺伝子クローニングを行い、現在まですべてに成功した。そこでこれらの遺伝子を使用して昨年に引き続き転写実験を行ったが、本年度はCCK遺伝子に重点をおいて行った。(1)in vitroにおけるCCK遺伝子の転写-転写開始点が2ヶ所であることをSIマッピング法とプライマー伸長法で決定した。さらに半定量的dot blot分析法で-225からの転写産物が-59からのものの3%に過ぎないことを見出した。無細胞転写実験では2つの転写開始点に相応する2つの転写産物を見出すことが出来た。-59の主要な転写開始点を目標にプロモーター領域を決定するために欠失mutantを作製し実験を行った。その結果、-254〜-105にプロモーター活性が保持されていることが明らかとなった。(2)転写制御因子-ラット脳の細胞核抽出液中に存在して上述のプロモーター領域と結合してCCK遺伝子の細胞特異的転写の制御に関与していると考えられる調節因子蛋白を検討した。ゲルシフト分析法で4つのバンドを見出したが、その中のバンド4が脳特異的でb或はd断片と結合しその領域は-321〜-203であった。Oligodeoxynucleotide(X、Y、Z)を合成すると共にそのmutantを作製してゲルシフト分析を行った結果Zの中のCC(-230、-231)が重要であることが明らかになった。

Central nervous system cells are composed of three kinds of cells: cell cycle, and cell cycle. We have successfully conducted the research on NSE, CCK, S-100 beta protein, CNP, and NSE protein. This year's CCK report focuses on the implementation of CCK regulations. (1)in Vita A semi-quantitative dot blot analysis of-225 percent of the total product was performed. Cell-free writing starts at 2:00 p.m. and ends at 2:00 p.m. - 59. The main purpose of this article is to determine the origin of the mutation. The results,-254 to-105, were maintained. (2)The expression of regulatory factors in cell nuclear extracts is related to the expression of regulatory factors in cell specific cells. The analysis method of four kinds of fragments can be used to analyze the specific b or d fragments in the field of-321 ~-203. Oligodeoxynucleotide(X, Y, Z) is synthesized in the presence of a mutant and analyzed in the presence of CC(-230,-231).

项目成果

Toru,Ichimura: Proc.Natl.Acad.Sci. 85. 7084-7088 (1988)

市村彻：Proc.Natl.Acad.Sci。

Yasuo,Takahashi: "Proceeding of 6th international symposium on Calcium-binding proteins in health and disease" PLENUM PRESS,

Yasuo，Takahashi：“第六届健康与疾病中钙结合蛋白国际研讨会论文集”PLENUM PRESS，

高橋康夫: 蛋白質、核酸、酵素. 33. 1681-1687 (1988)

高桥康夫：蛋白质、核酸、酶。33。1681-1687 (1988)

Toru,Yamakuni: J.Neurochem.50. 282-284 (1988)

山国彻：J.Neurochem.50。

高橋康夫: 神経精神薬理. 10. 409-433 (1988)

高桥康夫：神经精神药理学。10。409-433（1988）