ニューロン及びグリア細胞における細胞特量蛋白遺伝子の転写制御機構の研究

神经元和胶质细胞细胞特异性蛋白基因转录调控机制研究

• 批准号: 62620507
• 负责人: 高橋 康夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-62620507/
• 关键词: ニューロン; グリア細胞; 遺伝子; 転写; 制御因子蛋白; プロモーター; エンハンサー; ゲルシフト分析

中枢神経系細胞はニューロンアストログリアオリゴデンドログリアの3種類の細胞から構成されているがその発生分化は殆ど解明されていない. 我々はニューロン特量蛋白としてニューロン特量エノラーゼ(NSE)コレンストキニン(CCK)アストログリア特量蛋白としてS-100βオリゴデンドログリア特量蛋白として2′, 3′環状ヌクレオチド水解酵素(CNP)について夫々遺伝子クローニングを行い現在前3者では成功した. そこでこれらの遺伝子を使用して以下の転写実験を行った.(1)HeLa細胞由来の無細胞転写系を使用してNSE, CCK, S-100β遺伝子の転写を検討しNSE, CCKでは忠実な転写産物を得ることができた. プロモーター領域の固定を行うこともできた. しかしS-100βでは成功しなかった. 脳核抽出液やニューロブラストームグリオーム培養細胞抽出液で試みたが未だ成功しなかった.(2)NSE, S-100βの遺伝子の5′隣接領域のDNA断片とCAT遺伝子或はlacZ遺伝子とを結合した融合遺伝子を作成し培養細胞に導入しinvivo転写実験を行った. 欠失DNA断片を使用した結果プロモーター領域やサイレンサーなどの存在を立証した.(3)NSE, CCK, S-100βの遺伝子の5′隣接領域のDNA断片と結合して転写を制御すると考えられる脳細胞核内蛋白因子を検索し夫々の遺伝子に結合する蛋白の存在をゲルシフト分析法ExonucleaseIII法, DNaseIfootprinting法により証明することが出来た. この中S-100βについてはSouth-Wastern法でその蛋白の分子量を測定し約67000であることを見出した.

The central nervous system cells are divided into three types: the cell structure, the cell differentiation, and the cell differentiation. The first three of them succeeded in the first three steps of the study. The following is an example of how to write a script. (1) Using the cell-free writing line derived from HeLa cells, we will discuss the writing of NSE, CCK, and S-100β genes. NSE and CCK will be able to write products in real time. The fixed line of the field is fixed. S-100β is successful. The culture medium of nuclear extract was not successful. (2) DNA fragments from 5′ adjacent regions of NSE, S-100β gene and CAT gene or lacZ gene were introduced into cultured cells in vivo. The use of missing DNA fragments results in the establishment of evidence of the existence of missing DNA fragments in the field. (3) DNA fragment binding in the 5′ adjacent domain of NSE, CCK, S-100β gene was examined for the presence of protein binding in the 5′ adjacent domain of NSE, CCK, S-100β gene. The molecular weight of the protein was determined by the South-Western method with S-100β.

项目成果

Hiroshi Usui: Biochemisyry Internat.15. 809-816 (1987)

臼井宏：生物化学国际.15。

高橋 康夫: 実験医学. 6. 32-36 (1988)

高桥康夫：实验医学。6. 32-36 (1988)

Tadaoki Kurihara: J.Biol.Chem.262. 3256-3261 (1987)

栗原忠兴：J.Biol.Chem.262。

Kenji Sakimura: Gene. 60. 103-113 (1987)

崎村健二：基因。

Ryozo Kuwano: Moleculir Brain Res.2. 77-82 (1987)

桑野良三：分子脑研究2。