ニューロン及びグリアに局在する機能蛋白質の遺伝子発現調節蛋白の分離と超微量分析

神经元和神经胶质细胞中功能蛋白的基因表达调控蛋白的分离和超痕量分析

• 批准号: 63638505
• 负责人: 高橋 康夫
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63638505/
• 关键词: ニューロン; グリア細胞; 遺伝子; 転写; 調節因子蛋白; 微量分析; プロモーター

神経回路網の形成に関与する蛋白のうち神経伝達物質として機能すると考えられるコレシストキニン(CCK)及びニューロンの突起伸長作用を有するS-100βの2つの機能蛋白の遺伝子をクローニングし、その構造を解明した。これらの遺伝子のプロモータ領域と結合してその遺伝子発現を制御すると考えられる微量蛋白についてこれを分離しその構造を解明しようと試みた。今年度はその中のCCKの遺伝子発現調節蛋白について述べる。(1)ゲルシフト分析法及びDNase footprinting法によって脳の細胞核抽出蛋白と結合すると考えられるDNA領域を明らかにすることができた。そこでゲルシフト分析法で見出した4コのバンドのうち脳特異的と認められた第4のバンドに相応する蛋白を精製しようと試みた。(2)精製の手段として以下の方法を使用した。先づ脳の細胞核の抽出液を硫安で分画し、10〜60%硫安画分を集めてヘパリン-アガロースクロマトグラフィーを行い、食塩による段階的溶出を行い、ゲルシフト分析で各溶出画分を検討して、第4バンドの蛋白を含む画分を26mp_2の合成したOligodeoxynucleotideをカップリングしたDNA affimtyカラムで精製を行った。また別にヘパリン-アガロースクロマトグラフィー後の画分をゲルシフトで分析しその第4バンドより直接蛋白を溶出した。(3)両者の方法で得た蛋白をSDS-PAGEで分析した処、何れの方法でも殆んど単一と思われるバンドを得ることが出来た。この蛋白について今後より詳細な検討を行う予定である。

The formation of the neural network is related to the protein expression of all kinds of neural proteins, and the structure of S-100β protein expression is clarified by examining the protein expression of CCK and CCK. A study on the control of microprotein production in the field of protein binding and protein separation; This year, CCK gene expression regulatory protein was detected in the middle of the cell cycle. (1)DNA extraction and DNA footprinting methods are used to detect DNA binding. The analysis method of protein purification can be used to identify the protein in the fourth part. (2)The following methods are used for refining The extract of the first cell nucleus was analyzed by sulfur and sulfur, and the 10 ~ 60% sulfur and sulfur fractions were collected. The dissolution of the first cell nucleus was analyzed by sulfur and sulfur analysis. The dissolution fractions of the fourth cell nucleus were analyzed by sulfur and sulfur analysis. The synthesis of Oligodeoxynucleotide was performed by sulfur and sulfur analysis. The fourth part of the analysis is the direct protein dissolution. (3)The method of SDS-PAGE analysis was used to determine the protein content. This protein will be discussed in detail in the future

项目成果

Toru,Ichimura: Proc.Natl.Acad.Sci. 85. 7084-7088 (1988)

市村彻：Proc.Natl.Acad.Sci。

Yasuo,Takahashi: "Proceeding of 6th international symposium on Calcium-binding proteins in health and disease" PLENUM PRESS,

Yasuo，Takahashi：“第六届健康与疾病中钙结合蛋白国际研讨会论文集”PLENUM PRESS，

高橋康夫: 蛋白質、核酸、酵素. 33. 1681-1687 (1988)

高桥康夫：蛋白质、核酸、酶。33。1681-1687 (1988)

Toru,Yamakuni: J.Neurochem.50. 282-284 (1988)

山国彻：J.Neurochem.50。

高橋康夫: 神経精神薬理. 10. 409-433 (1988)

高桥康夫：神经精神药理学。10。409-433（1988）