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テラトカルシノーマの分化方向決定に関連する遺伝子の転写制御と機能

畸胎癌分化方向相关基因的转录调控及功能

基本信息

批准号：
63620514
负责人：
村松喬
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

テラトカルシノーマ幹細胞HM-1のレチノイン酸による分化初期段階で発現が増強するcDNAクローンMK-1について研究し、以下の結果を得た。MK-1クローンと3'側の構造は一致するのが5'側の構造が異るcDNAクローンを得てMK2、MK3と命名した。ゲノムDNAの解析により、これらMK遺伝子は3KbのDNA上に、MK3、MK2、MK1に特異的な配列、そしてこれらに共通な配列がこの順序に並んでいることが明らかになった。また、プライマー伸長法、リボヌクレアーゼプロテクション法により、MK2配列が主たるMK RNAであることも判明した。さらに、5'域のオリゴA鎖に不均一性が見られ、最も多いケースではA=9であることも分った。この際、MKポリペプチドの分子量は15000となり、N末端側にシグナルペプチド配列を持つことになる。この配列が、実際にプロセッシングを受けることはミクロソーム標品を用いて確認した。したがって、MKポリペプチドは細胞外へ分泌される可能性が高くなった。主たるMK RNAとなるMK2の上流域のゲノムDNA構造を解析すると、エストロジェン応答エレメントとホモロジーの高い配列が見出された。この配列にレチノイン酸とそのレセプターの複合体が結合する可能性が高く、遺伝子導入による解析を始めた。in situハイブリダイゼンションによって、MK RNAはマウス5日胚では発現されず、7-9日胚で一様に発現し、11-13日胚ではいくつかの上皮組織を中心に限定した発現を示し、15日胚以降では腎臓にのみ発現されるようになることが判明した。この一過性の発現は、テラトカルシノーマ幹細胞のin vitro分化時に認められる現象と一致し、MKポリペプチドが分化過程で重要な役割を果すことを示唆する。MK2cDNAをSV40あるいはRSVのプロモーターの支配下に遺伝子導入して、機能的解析に進んでいる。

Tetrastem stem cell HM-1 のレチノイン acid による initial stage of differentiation で発We have conducted research on the enhanced cDNA MK-1 and the following results have been obtained. MK-1 has the same structure on the 3' side and the structure on the 5' side is different. The cDNA has been named MK2 and MK3.ゲノムDNA analysisにより、これらMK 缝子は3KbのDNA上に、MK3、MK2、MK 1にSpecial Na Arrangement, Common Naar Arrangement, No Arrangement Order, and Unique Arrangement. MK RNA is clear.さらに, 5' domain のオリゴA lock non-uniformity が见られ, most も多いケースではA=9であることも分った.この记, MK ポリペプチドの molecular weight は15000 となり, N-terminal side にシグナルペプチド arrangement をhold つことになる.この配arrayが、実记にプロセッシングをReceived けることはミクロソームstandard product を用いてconfirmationした.したがって, MK ポリペプチドは extracellular secretion される possibility is high くなった. MainたるMK RNAとなるMK2 upper basinのゲノムDNA structureをanalysisすると、エストロジェン応达エレメントとホモロジーの高い配arrayが见出された. The combination of the combination of the acid and the acid of the にレチノイン acid and the complex of the combination of the する possibility is high, and the remaining 伝子 imports of によるanalytics of the beginning. in situハイブリダイゼンションによって、MK RNA is the epithelium of embryos on day 5, embryos on days 7-9, and embryos on days 11-13. The center of the tissue is limited and the results are clear and the results are clear after the 15th day of pregnancy. Transient symptoms, テラトカルシノーマstem cells In vitro differentiation, the phenomenon of sterilization is consistent, and the differentiation process of MK ポリペプチド is very important. MK2cDNAをSV40あるいはRSVのプロモーターの was controlled by the introduction of the remaining DNA, and the analysis of the function was carried out.