ポリーN-アセチルラクトサミンの癌浸潤における役割

聚-N-乙酰乳糖胺在癌症侵袭中的作用

• 批准号: 02F00661
• 负责人: 村松 喬
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F00661/
• 关键词: センス; アンチセンス; ポリーN-アセチルラクトサミン; ES細胞; ノックアウトマウス; 繊維芽細胞; β1-6アセチルグルコサミンニルトランスフェラーゼ

ポリーN-アセチルラクトサミン合成にかかわる酵素β1-6アセチルグルコサミンニルトランスフェラーゼ(IGnT A及びIGnT B)の発現を抑えるのために、IGnT遺伝子の翻訳開始部位をターゲットとするセンス及びアンチセンス(IGnT A : GACCCTTGAGCATGCCTCCGT ; IGnT B : TGCTTTGGGAAGATGGGCTCTTGG)配列をもったモルフォリノ誘導体を作成した。そして、Es細胞、EC細胞(F9及びP19)にトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞を用いて、酵素活性測定、RT-PCR法による遺伝子の発現解析及び^3H-フコースでメタボリックラベルした後、糖鎖の解析を行った。いずれの場合もセンス、アンチセンスで大きな変化は確認できなかった。そこでIGnT遺伝子ノックアウトマウスを作成するためにIGnT A、IGnT B共通のエクソン(エクソンIII)を欠失したコンスラクトを作成した。このコンスクラクトをES細胞にエレクトポーレイションでトランスフェクトし、G418で選択した。生き残ったES細胞156個をサザンブロット法で解析した結果、内在性IGnT遺伝子と相同組換えを起したES細胞は1個のみであった。この細胞を用いて、キメラマウスを作成した。IGnTノックアウトマウスを作成するために、キメラマウスを野生型C57BL/6Jと交配して、F1ヘテロマウスを得ることができた。F1のヘテロ同士を交配して、IGnT遺伝子ノックアウトマウス得ることができた。このマウスについてノーザンブロット及びサザンブロットで遣伝子のノックアウトを確認することできた.肝臓、腎臓、小腸、胃の組織抽出物を用いて、IGnTの活性を調べたところ、いずれも活性が野生型に比べて消失していた。現在ノックアウトマウス由来の繊維芽細胞の癌化細胞、さらに、ノックアウトマウス由来のES細胞を樹立し、これらの造腫瘍能をこれらにIGnTをトランスフェクトしたものと比較しょうと研究を続けている。

ポ リ ー N - ア セ チ ル ラ ク ト サ ミ ン synthetic に か か わ る enzyme beta 1-6 ア セ チ ル グ ル コ サ ミ ン ニ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ (IGnT A and び IGnT B) の 発 now を え suppression る の た め に, IGnT but 伝 の 訳 start part を タ ー ゲ ッ ト と す る セ ン ス and び ア ン チ セ ン ス (IGnT A: GACCCTTGAGCATGCCTCCGT ; IGnT B: TGCTTTGGGAAGATGGGCTCTTGG) is combined with を を ったモ ったモ フォリノ フォリノ フォリノ inducer を to form <s:1> た. Youdaoplaceholder0 て て, Es cells, EC cells (F9 and びP19)にトラ た スフェ ト ト た た. ト ラ ン ス フ ェ ク ト し た cells を using い て, enzyme activity determination, rt-pcr method に よ る posthumous son 伝 の 発 parsing and now び ^ 3 h - フ コ ー ス で メ タ ボ リ ッ ク ラ ベ ル し た, sugar after lock line analytical を の っ た. い ず れ の occasions も セ ン ス, ア ン チ セ ン ス で big き な variations change は confirm で き な か っ た. そ こ で IGnT posthumous son 伝 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス を made す る た め に IGnT, IGnT B common の エ ク ソ ン (エ ク ソ ン III) lost を owe し た コ ン ス ラ ク ト を made し た. こ の コ ン ス ク ラ ク ト を ES cells に エ レ ク ト ポ ー レ イ シ ョ ン で ト ラ ン ス フ ェ ク ト し, G418 で sentaku し た. Raw き residual っ た ES cells 156 を サ ザ ン ブ ロ ッ ト method で し た results, internality IGnT heritage 伝 と son in the same group え を up し た ES cells は 1 の み で あ っ た. The <s:1> <s:1> cell を is made of を て and キメラ ウスを ウスを. IGnT ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス を made す る た め に, キ メ ラ マ ウ ス を wild type C57BL / 6 j と mating し て, F1 ヘ テ ロ マ ウ ス を have る こ と が で き た. F1 の ヘ テ ロ mating with "を し て, IGnT but 伝 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス have る こ と が で き た. こ の マ ウ ス に つ い て ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト and び サ ザ ン ブ ロ ッ ト で son sent 伝 の ノ ッ ク ア ウ ト を confirm す る こ と で き た. Crucial crucial liver, kidney, intestine, stomach の tissue extract を with い て, IGnT の activity を adjustment べ た と こ ろ, い ず れ も active が wild-type に than べ て disappear し て い た. Now ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス origin の 繊 d の bud cells cancerous cells, さ ら に, ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス origin の ES cells を し, こ れ ら の can build swollen sores を こ れ ら に IGnT を ト ラ ン ス フ ェ ク ト し た も の と compare し ょ う と research を 続 け て い る.