レチノイン酸による分化脱がん時に初期応答する遺伝子群の解析

分析对视黄酸诱导的分化和癌症去除做出早期反应的基因

• 批准号: 01015091
• 负责人: 村松 喬
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01015091/
• 关键词: レチノイン酸; 成長因子; ヘパリン; 分化誘導; 胚性腫瘍細胞; テラトカルシノーマ; 胚発生; 脱がん

胚性腫瘍細胞をレチノイン酸によって分化誘導した時に発現が増強するcDNAクローンMKおよびその遺伝子について研究を進めた。MK遺伝子の5′上流2キロベースをクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)遺伝子につなぎ、胚性腫瘍細胞F9に導入すると、CAT活性がレチノイン酸によって誘導されるようになった。分化誘導の条件を変えた時に、MK遺伝子の発現は同様に起り、分化の方向性とMK遺伝子の発現の間に強い相関は認められなかった。レチノイン酸を培地から取り除くとMK遺伝子の発現は制えられ、レチノイン酸とレセプターの複合体がMK遺伝子の発現を直接制御している可能性が強い。MKcDNAをbetaーアクチンとウス肉腫ウイルスのプロモーターにつなぎ、L細胞に導入した。すると細胞外にMKポリペプチドが分泌され、MKポリペプチドは分泌タンパク質であることが判明した。また、ヘパリンアガロースカラムクロマトグラフィーの結果、MKポリペプチドはヘパリン結合能があることが判明した。ヘパリンを添加することにより、MKポリペプチドは安定化し、レチノイン酸処理した胚性腫瘍細胞の培地に分泌されていることも確認できた。以上のように、MKポリペプチドは成長因子と類似の性質を示す分子であり、細胞分化の制御に深くかかわっていると示唆された。MKポリペプチドの機能を直接的に検証するために、MKcDNAを導入したL細胞が分泌するMKポリペプチドを、CMセファデックス、フェニルセファロース、ヘパリンアガロースのカラムクロマトグラフィーを組み合せて、タンパク質としてかなりの純度まで精製した。

Embryonic cells swollen sores を レ チ ノ イ ン acid に よ っ て induction し た when に 発 が now raised strong す る cDNA ク ロ ー ン MK お よ び そ の posthumous son 伝 に つ い を て research into め た. MK posthumous son 伝 の 5 'upper 2 キ ロ ベ ー ス を ク ロ ラ ム フ ェ ニ コ ー ル ア セ チ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ (CAT) heritage 伝 son に つ な ぎ cells, embryo sex is swollen sores F9 に import す る と, CAT activity が レ チ ノ イ ン acid に よ っ て induced さ れ る よ う に な っ た. Induction を の conditions - え た に, MK heritage 伝 son の 発 は now with others に り, differentiation の directional と MK but 伝 の 発 is の に between strong い phase masato は recognize め ら れ な か っ た. レ チ ノ イ ン acid を petty か ら take り except く と MK posthumous son 伝 の 発 は make え ら れ, レ チ ノ イ ン acid と レ セ プ タ ー の complex が MK heritage 伝 son の 発 を now direct suppression し て い い が る possibility. MKcDNA を beta ー ア ク チ ン と ウ ス meat swollen ウ イ ル ス の プ ロ モ ー タ ー に つ な ぎ, L cells に import し た. す る と extracellular に MK ポ リ ペ プ チ ド が secretion さ れ, MK ポ リ ペ プ チ ド は secretion タ ン パ ク qualitative で あ る こ と が.at し た. ま た, ヘ パ リ ン ア ガ ロ ー ス カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー の results, MK ポ リ ペ プ チ ド は ヘ パ リ ン binding energy が あ る こ と が.at し た. ヘ パ リ ン を add す る こ と に よ り, MK ポ リ ペ プ チ ド は stabilization し, レ チ ノ イ ン acid 処 Richard し た embryo sex is swollen sores cells の petty に secretion さ れ て い る こ と も confirm で き た. Above の よ う に, MK ポ リ ペ プ チ ド は growth factor と similar の nature を in molecular で す あ り, cell differentiation の suppression に deep く か か わ っ て い る と in stopping さ れ た. MK ポ リ ペ プ チ ド の function を direct に 検 card す る た め に, MKcDNA を import し た が L cells secrete す る MK ポ リ ペ プ チ ド を, CM セ フ ァ デ ッ ク ス, フ ェ ニ ル セ フ ァ ロ ー ス, ヘ パ リ ン ア ガ ロ ー ス の カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を group み close せ て, タ ン パ ク qualitative と し て か な り の purity ま で essence Make た.

项目成果

門松健治: "A retinoic acid responsive gene,MK,found in the teratocarcinoma system is expressed in spatially and temporally controlled manner during mouse embryogenesis" J.Cell Biol.(1990)

Kenji Kadomatsu：“畸胎瘤系统中发现的视黄酸反应基因 MK 在小鼠胚胎发生过程中以空间和时间受控的方式表达”J.Cell Biol.(1990)

松原修一郎: "Structure of a retinoic acid responsige gene,MK,which is transiently activated during differentiation of embryonal carcinoma cells" J.Biol.Chem.(1990)

Shuichiro Matsubara：“视黄酸反应基因 MK 的结构，在胚胎癌细胞分化过程中短暂激活”J.Biol.Chem.(1990)