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心筋細胞内Caイオンの動態に関する研究

心肌细胞Ca离子动力学研究

基本信息

批准号：
63624516
负责人：
重川宗一
金额：
$ 1.41万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至 1989
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ウシ心筋形質膜標品を各種のプロティンカイネースによりリン酸化した後に、カルモジュリンビーズあるいは抗Caポンプモノクローナル抗体を結合させた抗体ビーズを用いてCaポンプを分離して、Caポンプがリン酸化されているかどうか調べた。この方法では従来より報告されているA-カイネースによるリン酸化は確認されなかった。またC-カイネースによるリン酸化も検出されなかったが、新たにC-カイネースによるリン酸化が観察された。心筋形質膜標品をC-カイネースによりリン酸化すると、Caポンプの最大活性は変化しなかったが、Caに対する親和性が増加した。2.心筋リアノジンレセプターをイヌ心筋より調整した筋小胞体より、CHAPSを用いて可溶化後不連続しょ糖密度勾配遠心法及びヘパリンセファロースカラムクロマトグラフィーによって約60倍精製した。精製リアノジンレセプター標品は分子量約40万の単一蛋白質を含んでいた。精製リアノジンレセプターを抗原として用いてモノクローナル抗体の作成を行ない、6種類のモノクローナル抗体を得ることができた。これらモノクローナル抗体は心筋リアノジンレセプターをイムノドット及び免疫沈降反応において認識した。また、これら6種類のモノクローナル抗体のうち3種類は、ウェスタンブロットにおいて心筋小胞体及び精製リアノジンレセプター標品中の分子量約40万の蛋白質を確認したが、遅筋型及び速筋型骨格筋から調整した筋小胞体中のいかなる蛋白質も認識しなかった。遅筋型骨格筋より調整した筋小胞体への〔^3H〕リアノジンの結合を、心筋小胞体への結合と比較した。低イオン強度下(150mM KCl)での〔^3H〕リアノジンの結合に対するATP要求性、及び高イオン強度下(1M KCl)における〔^3H〕リアノジンに対する親和性(Kd)に関して大きな違いが存在することが明らかになった。

1. It is a kind of membrane standard with various kinds of calcium ions. It can be used to separate calcium ions from calcium ions and acidify them. This method is reported in the A-list. The C-box is a new type of box, and the C-box is a new one. The maximum activity of the C-type membrane standard was increased. 2. The heart muscle can be adjusted to the muscle cell structure, and the CHAPS is used to dissolve the non-continuous sugar density and match the remote center and the white powder. It is about 60 times more refined. The purified protein standard has a molecular weight of about 400,000 and contains a protein. The preparation of 6 kinds of anti-tumor antibodies was carried out in order to purify the anti-tumor antigen. This is the first time that the immune system has been used to detect the immune response. The protein with molecular weight of about 400,000 in the standard sample was confirmed and the protein in the muscle cell of the muscle type and the muscle type was adjusted. The structure of the muscle cells is adjusted by the combination of the muscle cells and the muscle cells. ATP requirement for binding of [^3H] free radicals at low concentrations (150mM KCl) and affinity (Kd) for binding of [^3H] free radicals at high concentrations (1M KCl) are relevant to the presence of [^3H] free radicals.