膜細胞骨格蛋白質異常に基づく心筋細胞機能失調の研究

基于膜细胞骨架蛋白异常的心肌细胞功能障碍研究

• 批准号: 08258227
• 负责人: 重川 宗一
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08258227/
• 关键词: 心筋症; 心筋症ハムスター; ジストロフィン; ジストロフィン結合糖蛋白質; 細胞骨格

遺伝性心筋症ハムスター(BIO14.6strain)心筋では、細胞骨格系の蛋白質dystrophin(Dys)とその結合蛋白質群(DAP)との複合体が正常に形成されておらず、筋肉細胞特異的なDAPであるα-、β-、γ-、及びδ-sarcoglycan(SG)が著しく減少又は消失していた。心筋症ハムスター心筋におけるα-、β-、γ-SGのmRNAの発現量や翻訳領域のcDNA配列はともに正常であったが、δ-SGのmRNAが発現しておらずこの蛋白質の遺伝子に異常が存在する可能性が考えられた。次に、SGの機能の検討やDys複合体形成に重要な役割を果たす蛋白質の検索などを行うため、心筋と類似したDys複合体を発現する骨格筋株細胞を選び、SGに対するアンチセンスオリゴヌクレオチド(AS-ODN)を導入してSGを欠損させた細胞モデル実験系を構築した。α-、γ-SGを欠損させた骨格筋株細胞では、細胞接着能の低下が観察されたので、SGと細胞接着との関連を検討したところ、Dys系と細胞接着に関わるintegrin系に密接な相互作用が存在することが明らかになった。すなわち、正常な細胞可溶化物からは、DysまたはSGに対する抗体によってDys複合体と共にintegrinとその結合蛋白質群が共沈澱したが、α-、及びγ-SGを欠損させた細胞においては、これらの蛋白質は免疫沈降物から40〜60%失われた。一方、細胞接着にともなって、α-、γ-SGのチロジン残基のリン酸化が観察された。これらの細胞で得られた結果は、Dys系がSGを介してintegrin系と情報伝達を行うことを強く示唆する。現在、ディファレンシャル・ディスプレイ法などを用いて、SGを欠損させた細胞で特異的に発現が変化する蛋白質のmRNAを選択し同定する試みを行っている。

Heritage 伝 sex disease of heart muscle ハ ム ス タ ー (BIO14.6 strain) heart muscle で は, cell skeleton is の protein dystrophin (Dys) と そ の binding protein group (DAP) と の complex が に normal form さ れ て お ら ず, brawn cell specific な DAP で あ る alpha, beta, gamma, and び delta - sarcog lycan(SG)が wrote that く decreased and が disappeared て て た た. Heart muscle disease ハ ム ス タ ー heart muscle に お け る alpha, beta, gamma - SG の mRNA の 発 quantity や now turn 訳 field の cDNA match column は と も に normal で あ っ た が, delta - SG の mRNA が 発 now し て お ら ず こ の に abnormal が の but 伝 protein sequence exists す る possibility が exam え ら れ た. Beg や に, SG の function の 検 Dys complex formation に important な "を cut fruit た す protein の 検 cable な ど を line う た め, heart muscle と similar し た Dys complex を 発 now す る skeletal muscle strain cells を び, SG に す seaborne る ア ン チ セ ン ス オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド (AS - ODN) を import し て SG を owe loss さ せ た cells モ デ ル be The laboratory department を constructs た. Alpha and gamma - SG を owe loss さ せ た skeletal muscle cell strains で は low, cells can then の が 観 examine さ れ た の で, SG と cells then と の masato even を beg し 検 た と こ ろ, Dys と cells then に masato わ る に integrin department contact な interaction exist が す る こ と が Ming ら か に な っ た. す な わ ち, normal な cells can melt か ら は, Dys ま た は SG に す seaborne る antibody に よ っ て Dys complex と altogether に integrin と そ の が binding protein group were precipitates し た が, alpha, and さ び gamma - SG を owe damage せ た cells に お い て は, こ れ ら の protein は immune sink か ら 40 ~ 60% loss of わ れ た. One side, the cell then にと にと なって, α-, γ -sg <s:1> チロジ, <s:1> residues <s:1> リ, <e:1> acidify が観 and された. で こ れ ら の cells have ら れ た results は, Dys が SG を interface し て integrin is と intelligence 伝 line of を う こ と を く and shown strong sucking す る. Now, デ ィ フ ァ レ ン シ ャ ル · デ ィ ス プ レ イ method な ど を with い て, SG を owe damage さ せ た cells で specific に 発 が now - the す る protein の mRNA を sentaku し with fixed す る try み を line っ て い る.

项目成果

Iwata,Y.et al.: "Dystrophin-glycoprotein complex purifird form hamster cardiac muscle. Comparison of the complex from cardiac and skeletal muscles of hamster and rabbit." J.Mol.Cell.Cardiol. 28. 2501-2509 (1996)

Iwata,Y.et al.：“从仓鼠心肌中纯化肌营养不良蛋白-糖蛋白复合物。来自仓鼠和兔子的心肌和骨骼肌的复合物的比较。”

岩田裕子: "心筋症ハムスターBIO14.6におけるAdhalin(50kDa dystrophin 結合タンパク質)の異常の検討" 心筋の構造と代謝. 18. 347-354 (1996)

Yuko Iwata：“心肌病仓鼠 BIO14.6 中 Adhalin（50kDa 抗肌营养不良蛋白结合蛋白）异常的检查”《心肌结构和代谢》18. 347-354 (1996)。

Yoshida,T.et al.: "Expression of dystrophin-sarcoglycan complex in serum-deprived BC3H1 cells and involvement of α-sarcoglycan in substrate attachment" Biochem.Biophys.Res.Commu.225. 11-15 (1996)

Yoshida, T. 等人：“抗血清蛋白-肌聚糖复合物在血清剥夺的 BC3H1 细胞中的表达以及 α-肌聚糖参与底物附着”Biochem.Biophys.Res.Commu.225 (1996)。

Hanada,H.et al: "mRNA expression and cDNA sequence of β- and γ-sarcoglycans are normal in cardiomyopathic hamster heart." Biol.Pharma.Bull. 20. 134-137 (1997)

Hanada, H. 等人：“心肌病仓鼠心脏中 β- 和 γ-肌聚糖的 mRNA 表达和 cDNA 序列是正常的。Biol.Pharma.Bull。”