超レパートリーを有するヒト型一本鎖抗体ライブラリを用いた抗ペプチド抗体の整列化

使用具有超级库的人源化单链抗体库比对抗肽抗体

• 批准号: 15012246
• 负责人: 奥井 理予
• 金额: $ 3.07万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15012246/
• 关键词: 一本鎖抗体; 抗体ライブラリ; ヒト型; 人工抗体; 整列化

本研究の目的は、すでに所属研究室で独自に作製したヒト型一本鎖抗体ライブラリを用い、多数の抗原ペプチドに対するアフィニティーの高い抗体を単離し整列化する方法論を確立することである。具体的には、ビーズ上に8,000種のペプチドが結合した抗原ペプチドライブラリを作製し、我々が独自に作製した10^<11>以上という膨大なレパートリーを有する抗体ライブラリを用いてスクリーニングを行っている。最終的にはファージ抗体と抗原ペプチドの配列を対応させたデータベース化を目指している。これにより、抗原のスクリーニングが容易になるだけなく、各種特異抗体のスクリーニングも不要になる可能性もあると考えている。今年度は、多数の抗原に対する抗体ファージを網羅的に短期間でスクリーニングするシステムの改良を行った。培養温度や発現誘導条件、菌株、ブロッキング剤などのスクリーニング諸条件を検討し、効率的なスクリーニング法を確立した。またビーズ上のペプチドに結合するファージ抗体を単離し、それぞれの抗体遺伝子配列を確認するとともに、ファージ抗体を整列化するための条件検討を行っている。この結果、一本鎖抗体の精製をハイスループットで行うために、精製用タグの改良が必要であると判断した。現在、新しい抗体ライブラリの作製を計画中である。我々の抗体ライブラリは短期間(2〜3週間)で作製できるため、ライブラリの改良が容易であるという点で非常に有利である。今後、このシステムを発展させ、整列化抗体による網羅的解析を行うためのシステムを構築する予定である。これまでに抗体の整列化に関する報告はほとんどないことから、本研究の成果は疾患の診断や治療に役立つ抗体を迅速かつ大量に得られる有用な手段となるであろう。また、機能ゲノム解析の一環としてのタンパク質大規模研究(プロテオミクス)にも大いに貢献できるものと期待される。

The purpose of this study is to establish a methodology for the isolation and sequencing of antibody-specific antibodies for most of the antigens selected by our laboratory. Specifically, there are 8,000 kinds of antibodies that can be used to bind to antigens, and we can control them independently<11>. Finally, the antibody and antigen are assigned to the target group. The possibility of different kinds of specific antibodies is discussed. This year, most of the antigens were collected and improved. Culture temperature, induction conditions, strains, culture conditions, culture conditions The conditions for antibody alignment are discussed. As a result, the purification of the antibody is necessary. Now, the new antibody production plan is in progress. The antibody can be produced in a short period of time (2 ~ 3 weeks). It is easy to improve the antibody. In the future, the development of this system, the analysis of the whole network of antibodies, and the construction of this system will be determined. The results of this study are useful tools for the diagnosis and treatment of diseases. A large number of large-scale qualitative studies have been conducted on the basis of functional analysis.