ヒト型一本鎖抗体ライブラリを用いた抗ペプチド抗体8000種類の整列化

利用人单链抗体库比对8000种抗肽抗体

• 批准号: 16012259
• 负责人: 奥井 理予
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16012259/
• 关键词: ヒト型; 一本鎖抗体; ライブラリ; ペプチド抗体; 整列化

本研究の目的は、すでに所属研究室で独自に作製した10^<11>以上という膨大なレパートリーを有するヒト型一本鎖抗体ライブラリを用い、多数の抗原ペプチドに対するアフィニティーの高い抗体を単離し整列化する方法論を確立することである。昨年度末より、8,000種類のペプチドビーズライブラリGly_3・X・Pro・X・X・Gly_3 (X:任意のアミノ酸)を用いて、抗原ペプチドと結合する一本鎖抗体のパンニングを行った。今年度は、コントロールペプチドを用いて単離した一本鎖抗体について、BIACORE 3000によって抗体親和性の評価を行い、スクリーニング法の有効性を確認した。この過程で現状の一本鎖抗体精製法ではハイスループットに不向きであることが判明した。そのため、精製用タグを改良した新しいベクターを作製し、精製法も改良した。同時に新たにリプレッサー・シャペロン発現ベクターを作製し、可溶性抗体発現量の増大および得られたクローンの安定性の向上が見込めるようになった。今後これらを利用した新ライブラリに切り替える予定である。また、抗原ペプチドと結合する一本鎖抗体を集団のまま(ポリクローナルファージ抗体)、384穴プレート25枚分(9,600クローン)として整列化するためのプロトコールの見直しおよび機器類の条件検討を行った。今後、上記の諸条件を統合したシステムで、新しい抗体ライブラリを用いてスクリーニングし、抗体を整列化した後、メンブレンまたはチップ上に固相化する予定である。最終的にはファージ抗体と抗原ペプチドの配列を対応させたデータベースの構築を目指している。これにより、抗原のスクリーニングが容易になるだけなく、各種特異抗体のスクリーニングも不要になる可能性もあると考えている。

は の purpose, this study す で に affiliated laboratory で に alone cropping し た 10 ^ < 11 > above と い う swelled な レ パ ー ト リ ー を have す る ヒ ト type a lock antibody ラ イ ブ ラ リ を い, most の antigen ペ プ チ ド に す seaborne る ア フ ィ ニ テ ィ ー の high い antibody を 単 to し whole column turns す を る methodology established す る こ と で あ る. Yesterday at the end of the year よ り, 8000 species の ペ プ チ ド ビ ー ズ ラ イ ブ ラ リ Gly_3 · · Pro · · · Gly_3 X X X X: (any の ア ミ ノ acid) を with い て, antigen ペ プ チ ド と combining す る a lock antibody の パ ン ニ ン グ を line っ た. Our は, コ ン ト ロ ー ル ペ プ チ ド を with い て 単 from し た a lock antibody に つ い て, 3000 に BIACORE よ っ て antibody affinity の review 価 を い, ス ク リ ー ニ ン の グ method have sharper sex を confirm し た. The <s:1> process で current situation <e:1> the one-lock antibody refining method で ハ ハ ハ ス <s:1> プットに プットに プットに プットに プットに does not determine the た from <s:1> である とが とが とが. Youdaoplaceholder0 ため, タグを for refining, modified <s:1> た, new <s:1>, ベ ベ, タ, タ, を, を for making <s:1>, and <s:1> for refining, modified た. At the same time new た に に リ プ レ ッ サ ー · シ ャ ペ ロ ン 発 now ベ ク タ ー を as し, の raised large amount of soluble antibody 発 now お よ び must ら れ た ク ロ ー ン の stability の が see upward 込 め る よ う に な っ た. In the future, <s:1> れらを will use the new ラ ラ ブラリに ブラリに to determine である for える. ま た, antigen ペ プ チ ド と combining す る を set a lock antibody 団 の ま ま (ポ リ ク ロ ー ナ ル フ ァ ー ジ antibody), 384 den プ レ ー ト 25 points (9600 ク ロ ー ン) と し て whole column change す る た め の プ ロ ト コ ー ル の see straight し お よ び machine class 検 の conditions for line を っ た. All terms in the future, written の を integration し た シ ス テ ム で, new し い antibody ラ イ ブ ラ リ を with い て ス ク リ ー ニ ン グ し, antibody を whole column し た, メ ン ブ レ ン ま た は チ ッ プ に on solid phase change す る designated で あ る. Final に は フ ァ ー と ジ antibody antigen ペ プ チ ド の match column を 応 seaborne さ せ た デ ー タ ベ ー ス の build を refers し て い る. こ れ に よ り, antigen の ス ク リ ー ニ ン グ が easy に な る だ け な く, all kinds of specific antibodies の ス ク リ ー ニ ン グ も don't に な る possibility も あ る と exam え て い る.