ヒト型一本鎖抗体遺伝子ライブラリの作製

人单链抗体基因库的建立

基本信息

  • 批准号:
    13770237
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.02万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
  • 财政年份:
    2001
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2001 至 2002
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

近年、一本鎖抗体を用いた研究や創薬・治療が注目を浴びている。しかし、これまでに報告されている一本鎖抗体ライブラリは、抗体レパートリーが少ない、不安定であるなどの欠点があった。昨年度、我々は独自に改良した方法により、安定でレパートリー数の多いファージ提示型ヒト型一本鎖抗体ライブラリの簡易作製システムを開発した。その結果、約10^<10>レパートリーをカバーするヒト型一本鎖抗体ライブラリを作製することに成功した。今年度は、抗体ライブラリの安定性をさらに向上させるため、ベクターの改良を行い、さらに質の高いライブラリを作製することができた。また、一本鎖抗体ライブラリを用いてスクリーニングを行い、ELISAによる結合活性の有無を調べた結果、抗原と結合するファージ抗体を単離することができた。抗体のスクリーニングに用いる抗原は、20アミノ酸程度の合成ペプチド、あるいは、大腸菌で発現させた目的の遺伝子(全長または機能遺伝子部分)の組換えタンパク質とし、1)抗原をイムノチューブに固定化する方法2)抗原をビーズに固定化する方法の2種類を用いてファージのスクリーニングを行った。その結果、イムノチューブを用いる方法に比べ、抗原をビーズに固定化した方が非特異的なファージの混入が少なく、効率よくスクリーニングを行うことができた。以上のような方法を確立することにより、目的の遺伝子産物に対する特異的な抗体を、2週間程度でスクリーニングすることが可能である。新規遺伝子の機能を明らかにするため、目的の遺伝子産物に対する特異的な抗体を、ライブラリから迅速かつ効率的にスクリーニングできる系を確立することは、ポストゲノム時代にむけて、非常に有用な手段となるであろう。
In recent years, a lock antibody has been used in research and treatment. A lock on the body, a lock on the body. Last year, we developed our own method for improving, stabilizing, and increasing the number of user interfaces. The results were about 10 minutes, and the results were about 10 minutes<10>. This year, the stability of the antibody is improved, and the quality of the antibody is improved. The presence or absence of binding activity in ELISA, antigen binding, antibody binding, etc. Antibodies are used in the synthesis of antigen, 20-amino acid level, and Escherichia coli to produce the target protein (full-length and functional protein). 1) Antigen immobilization method 2) Antigen immobilization method. The results show that the method of immobilizing antigen is more effective than that of immobilizing antigen. The above methods were established to identify specific antibodies to the target gene product and to identify possible antibodies to the target gene product within 2 weeks. The function of the new gene is clearly defined, and the specific antibody for the target gene product is rapidly defined. The system is established, and the method is very useful.

项目成果

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