プロテインダイナミクスのプロテオーム解析に関する基礎的研究

蛋白质动力学蛋白质组学分析基础研究

• 批准号: 15013246
• 负责人: 榊原 陽一
• 金额: $ 3.52万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15013246/
• 关键词: プロテオーム解析; 情報伝達機構; マイクロドメイン; コレステロールラフト; コレステロール硫酸化; コレステロール硫酸転移酵素; チロシン硫酸化; Tyrosylprotein Sulfotransferase

細胞のシグナル応答によって誘導されるタンパク質のダイナミックな挙動をプロテオーム解析により網羅的に解析できる分析方法の確立を目的とし、そのための細胞分画条件、二次元電気泳動による分離条件の検討を行う。哺乳動物の細胞膜には、コレステロールやスフィンゴ脂質に富んだメンブランマイクロドメイン(ラフト)が存在する。近年、これらは細胞間情報伝達の場として重要な機能を持つことが明らかとなりつつある。細胞がシグナルを受け取ったときに多くのシグナル分子がこのラフト画分に集積してくることが報告されている。そこでシグナル伝達系の網羅的解析を目的としラフツ画分へ移行するタンパク質の網羅的解析によるシグナル伝達系全貌解明の糸口を見つける。またラフトの動的制御機構とコレステロール硫酸化の関係について検討する。さらに、タンパク質の細胞内輸送機構に関与すると考えられる翻訳後修飾としてのチロシン硫酸化の機能を解明するためにTyrosylbrotein Sulfotransferase(TPST)の諸性質の比較検討をを行う。ヒトおよびマウスにおいてSULT2B1と分類される硫酸転移酵素がラフトコレステロールを硫酸化することが判明した。ラフトを多く含むとされるTriton X-100耐性膜画分(DIG)のコレステロール硫酸化の結果、ラフトに局在する膜タンパク質が可溶性画分に局在性を変えることが生化学的な実験より明らかとなった。ヒトTPSTは2種類存在する、そこで、2種のTPSTの生化学的諸性質を比較検討した。その結果、これらのTPSTは基質特異性など酵素学的な諸性質が異なることから、タンパク質の機能を多様化する機構としてチロシン硫酸化が機能していることが推測された。今後、これらTPSTによって硫酸化されたタンパク質の細胞内輸送の違いについてプロテオームの手法を用いて解析する計画である。

The method of analytical analysis in the Internet makes sure that the purpose is established, the cell separation conditions are determined, and the separation conditions of the two-dimensional electrophoretic electrophoresis are determined. Lactation animals are infected with cell membrane, fat, fat and fat. In recent years, we have been able to meet the needs of the most important financial institutions in recent years. This is the first time to receive information about the number of molecules, the number of pictures, the collection of pictures, the number of reports, and the number of people. The purpose of the analysis of the network is related to the analysis of the network. The purpose of the analysis of the network is to draw a branch of the mobile network. The analysis of the network is full picture. The control agency that controls the operation of the train is responsible for the treatment of sulfation, sulfation, and oxidation. The mechanism of sulfation can be used to understand the performance of Tyrosylbrotein Sulfotransferase (TPST). The SULT2B1 was classified into several categories, sulfuric acid transferase, sulfation agent, sulfation agent and so on. The results of the sulfation test show that the Triton XPUE 100 tolerance film (DIG) is the most sensitive. The results of sulfation test show that the performance of the biochemistry is higher than that of the control. In TPST 2, there are many different kinds of biological chemistry, such as, TPST, and biochemistry. The results of the experiment, the characteristics of TPST-specific enzyme-specific enzyme, the mechanism of enzyme-specific enzyme, the mechanism of sulfation, the mechanism of sulfation. From now on, we will use the analytical method to analyze the method of sulfation, TPST, sulfation, and so on.

项目成果

榊原陽一, 三城恵美, Liu, M.-C., 水光正仁: "翻訳後修飾としてのチロシン硫酸化の機能解明"日本農芸化学会誌. 78巻1号. 34-36 (2004)

Yoichi Sakakibara，Emi Miki，Liu，M.-C.，Masahito Mizumitsu：“酪氨酸硫酸化作为翻译后修饰的功能阐明”日本农业化学学会杂志，第 78 卷，第 1. 34-36 期。 (2004)

Mishiro, E., Liu, M.-Y., Sakakibara, Y., Suiko, M., Liu, M.-C.: "Zebrafish Tyrosylprotein Sulfotransferase : Molecular Cloning, Expression an Functional Characterization"Biochemistry and Cell Biology. (In press). (2004)

Mishiro, E.、Liu, M.-Y.、Sakakibara, Y.、Suiko, M.、Liu, M.-C.：“斑马鱼酪氨酰蛋白磺基转移酶：分子克隆、表达和功能表征”生物化学和细胞生物学。