プロテインダイナミクスのプロテオーム解析に関する基礎的研究

蛋白质动力学蛋白质组分析基础研究

• 批准号: 12206073
• 负责人: 榊原 陽一
• 金额: --
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12206073/
• 关键词: プロテオーム; 二次元電気泳動; シグナル伝達; マイクロドメイン; コレステロールラフツ; Tリンパ球

細胞のシグナル応答によって誘導されるタンパク質のダイナミックな挙動を個々のタンパク質に的を絞らず、プロテオーム解析により網羅的に解析できる分析方法の確立を目的とし、そのための細胞分画条件、二次元電気泳動による分離条件の検討を行う。哺乳動物の細胞膜には、コレステロールやスフィンゴ脂質に富んだ膜ドメイン(ラフツ)が存在する。近年、これらは細胞間情報伝達の場として重要な機能を持つことが明らかとなりつつある。細胞がシグナルを受け取ったときに多くのシグナル分子がこのラフツ画分に集積してくることが報告されている。そこでシグナル伝達系の網羅的解析を目的としてラフツ画分へ移行するタンパク質のダイナミックな挙動を解析した。ラフツを反映していると考えられているDIG(Detergent Insoluble Glycolipid enriched membrane)のIPGストリップを用いた二次元電気泳動によるプロテオーム解析では約50のスポットが見られた、しかしながらMALDI-TOF/MSにより疎水性の強い膜タンパク質やシグナル分子は同定されなかった。16-BAC/SDS-PAGEによるプロテオーム解析の結果、DIG画分には約30のタンパク質のスポットが確認された。解析の結果、lckや三量体Gプロテインサブユニットなどが同定された。T細胞受容体を刺激し、その前後でDIG画分に移行するシグナル分子をウエスタンブロッティングにより解析した。その結果、SHP-1やZap-70が刺激後にラフツに移行してくることが判明した。T細胞受容体を刺激し、その前後でラフツに移行するシグナル分子を網羅的に解析することでT細胞受容体のシグナル伝達系の全体像を明らかにできる可能性が示された。しかし、これらは発現量の少ないタンパク質が多く、今後の課題として、ラフツの大量調製法の開発、感度の高い分析法の必要性が考えられた。

To establish the analytical method for the determination of the cell separation conditions and the separation conditions of the two-dimensional electrokinetic system. Mammalian cell membrane is rich in lipids and has a high molecular weight. In recent years, the information between cells has been transmitted to the field and important functions have been maintained. The cells are divided into two groups: the cells are divided into three groups: the cells are divided into two groups: the cells are divided into three groups: the cells are divided into two groups: the cells are divided into three groups: the cells are divided into two groups: the cells are divided into three groups; the cells are divided into three groups: the cells are divided into three groups: the cells are divided into three groups; the cells The purpose of the analysis of the network is to analyze the quality of the network. The IPG (Detergent Soluble Glycolipid Enriched Membrane) has been used in the analysis of two-dimensional electrokinetic behavior for about 50 years, and the MALDI-TOF/MS has been used in the analysis of IPG molecules. 16-BAC/SDS-PAGE analysis results, DIG analysis results about 30 samples were confirmed. The results of the analysis, lck and three-dimensional G. T cell receptor stimulation, before and after DIG mapping migration, molecular analysis SHP-1 and Zap-70 were identified as the following: The possibility of a complete picture of the T cell receptor system is shown by the analysis of the molecular network before and after stimulation of the T cell receptor. This paper discusses the necessity of the development of mass modulation method and sensitivity analysis method in the future.