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モニター蛍光タンパク質を用いた新規内分泌かく乱作用評価試験の開発

使用监测荧光蛋白开发新的内分泌干扰效应评估测试

基本信息

批准号：
15658034
负责人：
榊原陽一
金额：
$ 2.43万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を応用した内分泌かく乱作用評価試験法の確立を行い、種々の化学物質に対してエストロゲン様内分泌かく乱作用を検討し、スクリーニングを行う。FRETを応用した評価試験はレセプターとコアクチベーター間のリガンド依存的なタンパク質間相互作用を検出する方法である。従来のレセプターアッセイとは異なり結合リガンドと遊離リガンドを分離する必要が無く、実験装置を簡略化できることからハイスループット試験法としてより多くの試料の分析に適している。そこで、まず使用するレセプターとコアクチベーターのクローニングを行った。クローニングはPCRによるレセプター(ER□)およびコアクチベーター(SRC1)のリガンド結合部位の増幅およびそれぞれYFPおよびCFPとの融合タンパク質を作製した。しかしながら、計画時に予想していたFRETによる内分泌かく乱作用は検出されなかった。今後、蛍光タンパク質とのスペーサーの長さの検討など必要と判明した。内分泌かく乱物質の代謝産物も網羅的にその内分泌かく乱作用を検討する必要がある。そこで、内分泌かく乱物質の代謝機構として硫酸化に着目し、ヒトおよび魚類(ゼブラフィッシュ)の硫酸転移酵素による内分泌かく乱物質の硫酸化を検討した。その結果、ビスフェノールAなどフェノール構造を持つ内分泌かく乱物質が硫酸化されることが判明した。さらに、ビスフェノールAの塩素及び臭素置換対がより強い内分泌かく乱作用を持つことが明らかとなった。

The FRET method was used to determine the operation of the endocrine disorder test, the endocrine disruption test. The FRET protocol is used to verify the method of inter-cluster interaction in the context of inter-cluster inter-cluster dependency. In this connection, we need to know that it is necessary to do this, and that the device is not available because it is necessary to do so. Please do not know how to do this. In this case, I use the following words: I don't know what to do. We need to know that there is a gap between the two parts of the joint (SRC1), and that the width of the joint is similar to that of the joint. The width of the joint is similar to that of the PCR. The YFP is similar to that of CFP, and the fusion is caused by fusion. When you plan, you may want to make sure that the endocrine disorder is caused by FRET. From now on, it is necessary to know if it is necessary to make a decision. Endocrine disruption, endocrine disruption, endocrine disorder, endocrine disruption, endocrine The mechanism of sulfation, sulfation. The results showed that the endocrine disruptor, sulfation agent, sulfation agent, sulfation agent There is a strong endocrine disorder and a strong endocrine disorder in the presence of antidoxin and oxytocin.