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プロテインダイナミクスのプロテオーム解析に関する基礎的研究

蛋白质动力学蛋白质组分析基础研究

基本信息

批准号：
13206066
负责人：
榊原陽一
金额：
$ 4.16万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

プロテオーム解析の過程において、現在広く用いられているIPGストリップを使用した二次元電気泳動では、疎水性の強い膜タンパク質や、塩基性タンパク質などに必ずしも対応できていないのが現状である。そこで、膜タンパク質や塩基性タンパク質に対応したプロテオーム解析法の確立によるタンパク質の細胞内での発現量のみの検討ではなく、細胞のシグナル応答によって誘導されるタンパク質のダイナミックな挙動(転写因子の核への移行、シグナル分子のラフトへの移行など)、タンパク質の細胞内輸送系を個々のタンパク質に的を絞らず、プロテオーム解析により網羅的に解析できる分析方法の確立を目的とし、その二次元電気泳動による分離条件の検討、タンパク質細胞内輸送系の解析のための細胞システムの構築を検討する。電気泳動の分離条件としては非界面活性剤スルホビテイン(NDSB)3種を使用した膜タンパク質の分離条件の検討を行った。その結果、NDSBを使用することで膜タンパク質のIPGストリップによる一次元電気泳動での分離が特に酸性等電点領域で格段に向上した。現在、疎水性の非常に高い膜画分であるDetergent-Insoluble Glycolipid enriched membrane(DIG)画分をH9細胞より調製しさらに分離条件の検討を行っている。シグナル応答の解析において、T細胞受容体(TCR)を活性化したときにTCRの下流でシグナル伝達に関与する分子、LAT、lckやZap-70などの分解が確認された。このことからTCRの刺激に伴ってダウンレギューレーションを受ける分子群を網羅的に解析することでTCR下流のシグナル伝達系の全体像を明らかにできる可能性が示された。さらにダウンレギュレーシヨンの過程を定量的に分析した結果、TCR複合体と、ラフトに存在するシグナル分子群の分解は少なくとも2つの機構が存在することが示唆された。

The analysis process of プロテオームのにおいて, and now 広く uses いられているIPG ストリップを uses した two-dimensional electrophoresisでは, water-based strong い film タンパクquality や, basic タンパク性などに必ずしも対応できていないのがcurrent situation である.そこで, membrane タンパク性や塩 Basic タンパク性に対応したプロテオームAnalytical method establishedなく、Cell のシグナル応 Answer によって inducing されるタンパク性のダイナMito movement Transmigration system), intracellular transport system of タンパク性のを々のタンパク之にをThe exact method of analysis of the twisting and turning of the により snare The purpose of setting up is to analyze the separation conditions of the two-dimensional electrophoresis and the analysis of the intracellular transport system of the plasma and to construct the structure of the cells. The separation conditions for electrophoresis are as follows: non-interface active non-interface active membrane (NDSB) 3 kinds of separation conditions are used for electrophoresis and membrane isolation.そのResults, NDSB uses the することでmembrane タンパクquality のIPGストリップによるprimary electrophoresis でのseparation が特にacidic isoelectric point area でGrid segment した. Now, the water-based very high membrane draw points of the Detergent-Insoluble Glycolipid enriched membrane (DIG) draw points of the H9 cells are prepared by the separation conditions of the separation conditions.シグナル応のanalyticsにおいて、T cell receptor (TCR) をactivationしたときにTCRのDownloadでシグナル伝达に关与するmolecule, LAT, lckやZap-70などのanalyte confirmation された. The stimulation of TCR is accompanied by the stimulation of TCR Analyze the overall image of the TCR obscene TCR series and show the possibility of it.さらにダウンレギュレーシヨンの processをQuantitative analysisした results, TCR complexと,ラフトThe existence of the molecular group is the decomposition of the molecular group.