マウス脳由来およびES細胞由来神経幹細胞の生成・分化の解析

小鼠脑源性和ES细胞源性神经干细胞的生成和分化分析

• 批准号: 15016032
• 负责人: 等 誠司
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016032/
• 关键词: 神経幹細胞; 未分化神経幹細胞; Leukemia inhibitory factor; Epiblast; 糖鎖; LewisX抗原

神経幹細胞は全ての神経細胞・グリア細胞の起源であり、哺乳類脳の発生・構築に重要であるにもかかわらず、神経組織発生初期における神経幹細胞自体の生成の分子機構は、全くわかっていない。我々は、マウス胚性幹細胞(ES細胞)からleukemia inhibitory factor (LIF)依存性未分化神経幹細胞をin vitroで誘導できることを、既に報告した。本研究では、LIF依存性未分化神経幹細胞が生体内にも存在するかどうかを検討した。その結果、マウス胎生5.5-7.5日胚を分散して得た細胞を、LIF添加無血清培地で培養することにより、Nestin陽性の浮遊細胞塊(epiblast sphere)を得た。Epiblast sphereは自己複製能と神経系の多分化能を示し、神経幹細胞の基本性質を有するとともに、一部の未分化な非神経マーカー遺伝子を発現し、ES細胞由来の未分化神経幹細胞と同等の細胞と考えられた。さらに、epiblast sphereを継代培養することにより、in vitroで神経幹細胞に分化することが判明した。神経幹細胞生成の分子機構を解析するにあたり、有用な実験系になりうると考えられる。一方、神経幹細胞を特異的に分離できる細胞表面抗原の発見を目指し、神経幹細胞が形成するneurosphereに発現する糖鎖の解析を行なった。その結果、幾つかの脳特異的な糖鎖抗原の発現を確認するとともに、従来ES細胞の特異的マーカーと言われていたLewisX抗原が、neurosphereにも発現していることが判明した。これらの糖鎖抗原に対する抗体を用いた蛍光標識細胞分離により、神経幹細胞を効率的に分離できる可能性が示された。

The origin of neural stem cells, the development and construction of mammalian cells, the molecular mechanism of neural stem cell autogenesis in the early stage of neural tissue development. Embryonic stem cells (ES cells) are induced in vitro by leukemia inhibitory factor (LIF). In this study, LIF dependent undifferentiated neural stem cells were investigated in vivo. Results: Embryos were born 5.5-7.5 days after birth. Cells were isolated and cultured in serum-free medium. Nestin positive cells were isolated. Epiblast sphere has demonstrated the ability to replicate itself and to differentiate into multiple cells in the nervous system, the basic properties of neural stem cells, the development of some undifferentiated neural stem cells, and the origin of ES cells. In vitro differentiation of stem cells Analysis of the molecular mechanism of neural stem cell production A method for the specific isolation of neural stem cells and the detection of cell surface antigens As a result, the detection of specific LEWIS X antigen in ES cells was confirmed. The use of antibodies against these glycan antigens to identify cells for isolation and to demonstrate the possibility of efficient isolation of neural stem cells

项目成果

Kusunoki S, Morita D, Ohminami S, Hitoshi S, Kanazawa I: "Binding of immunoglobulin G antibodies in Guillain-Barre syndrome sera to a mixture of GM1 and a phospholipid : possible clinical implications."Muscle & Nerve. 27. 302-306 (2003)

Kusunoki S、Morita D、Ohminami S、Hitoshi S、Kanazawa I：“吉兰-巴利综合征血清中的免疫球蛋白 G 抗体与 GM1 和磷脂混合物的结合：可能的临床意义。”肌肉