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ALSモデルカニクイザルを用いた超早期病態解明および治療戦略構築

ALS模型食蟹猴超早期病理阐明及治疗策略制定

基本信息

批准号：
22K19359
负责人：
等誠司
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Shiga University of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

筋萎縮性側索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis: ALS)は運動ニューロンが選択的に変性・脱落する進行性の神経難病で、根本的治療法が存在しないため、患者の多くは数年で死に至る。我が国では約9000人のALS患者が存在すると言われ、その約１割は家族性と考えられている。家族性ALS責任遺伝子の１つであるFused in sarcoma（FUS）遺伝子に変異をもつALS患者は、若齢発症が特徴で進行が速いケースが多い。本研究は、ヒトと同じ運動神経系の構造をもつ旧世界ザルの１種であるカニクイザルを用いてALSモデルサルを作製し、ヒトでは解析不可能な発症超早期や未発症時期の運動ニューロンの病態を明らかにし、ALS発症超初期の病態に基づく新規診断・治療法の開発を目指す。これまでに、若年発症急速進行性のALSを引き起こすヒトFUS-P525L変異遺伝子をカニクイザル受精卵に導入したトランスジェニックカニクイザルの作出に成功しているので、令和4年度はエクソン14を欠失するFUS-G466VfsX14と同様の効果を生む遺伝子改変サルの作出を行った。カニクイザルFUS遺伝子のエクソン14の両側（イントロン13および14内）にCRISPR/Cas9の標的配列を複数設定した。カニクイザルES細胞に、標的配列に対するガイドRNAおよびCas9を発現するプラスミドをレポータープラスミドとともに遺伝子導入し、最も切断効率が良かった標的配列のペアを選別した。次いで、選択したガイドRNAとCas9タンパク質を人工合成してカニクイザル受精卵に導入し、胚盤胞期まで培養した後に、仮親の子宮に移植した。現在のところ、2頭の産児を得て表現型の有無を観察中である。

Muscular dystrophy with cord sclerosis (amyotrophic lateral sclerosis: ALS) is characterized by progressive eczema, basic treatment, and patients who have died for many years. There are about 9000 patients with ALS in our country. There are about 1% of them with familial symptoms. The patients with familial ALS were randomly divided into two groups: the first child, the second child, the second child The purpose of this study is to develop a new method for the treatment of diseases in the old world. In this study, in this study, we developed a new method for the treatment of diseases in the old world in the same period of time. In this study, in this study, we designed a method to treat one kind of disease in the old world by using the method of ALS treatment. It is impossible to treat the disease in the super-early stage of the disease. If the disease progresses rapidly, the ALS will start to change the number of zygotes in the FUS-P525L. The fertilized eggs will be re-fertilized in the first half of the year. The fertilized eggs will be re-fertilized in the first half of the year. In the last two years, the FUS-G466VfsX14 will be released in the same way. The configuration copy settings for FUS clusters are not available in the configuration copy settings for CRISPR/Cas9 clusters (within 13 files). The configuration of the ES cell, the RNA cell, the Cas9, the queue, the cell, the Cas9. In the second stage, select the artificial synthesis of RNA eggs, the transfer of fertilized eggs, the culture of embryos in the cell stage, and the transplantation of embryos. At present, the two-year-old table is currently in the process of observation.