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ジーントラップ・マイクロアレイを利用した感染宿主応答の分子遺伝学的解析

使用基因捕获微阵列对受感染宿主反应进行分子遗传学分析

基本信息

批准号：
15019065
负责人：
石田靖雅
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、新しいゲノム科学の手法をマウス樹状細胞の研究に応用することにより、感染宿主の免疫応答を分子遺伝学的に解析している。本年度は、マウスのES細胞RETジーントラップ・ベクター(改良型poly Aトラップ方式を採用)を利用してランダムなジーントラップを行い、これまでに約2000個のES細胞コロニーをピックアップした。それぞれのES細胞クローンからRNAを抽出し、3'RACE法によりトラップされた遺伝子のcDNA断片を増幅したあと、その塩基配列を決定した。その情報に基づき、それぞれの遺伝子に特異的なPCRプライマーを合成し、さらに高純度のcDNA断片を増幅し、DNAアレイを作製した。このアレイを用いたスクリーニングにおいて、マウスの脳で持異的に発現する新規遺伝子を見出し、その遺伝子がトラップされたES細胞クローンを用いることにより、直ちにその新規遣伝子に関するノックアウト・マウスを作製した。このことは、ランダムなジーントラップに基づいたDNAアレイを用いることにより、遺伝子の発現パターンのみを指標にして(その塩基配列には依存せず)全く新規の遺伝子群を同定し、直ちにそれらをマウスの個体レベルでノックアウトすることが可能である、ということを証明している(Matsuda, E.et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101,4170-4174,2004)。上記のDNAアレイを用い、現在、異なった分化段階にあるマウス樹状細胞で特異的に発現されている遺伝子群を同定中である。これとは別に、我々のジーントラップES細胞ストックの中にマウスのGelectin-7およびInterleukin-17D遺伝子がトラップされたクローンが発見されたため、それらを用いてノックアウト・マウスを作製中である。

This study is a new and scientific approach to the study of dendritic cells, the analysis of immune responses to infected hosts and molecular genetics. This year, about 2000 ES cells were collected from the ES cells using the modified poly A method. The cDNA fragments of ES cells were amplified by 3'RACE, and the nucleotide sequence was determined by 3'RACE. DNA amplification and synthesis of high-purity cDNA fragments This is the first time that a new gene has been discovered in a cell. This is the first time that a DNA fragment has been identified, identified, or demonstrated (Matsuda, E.et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101, 4170 - 4174, 2004). The above mentioned DNA fragments are used, present, differentiated, dendritic cells are developed specifically, and genetic subgroups are identified. In this case, the Gelectin-7 and Interleukin-17D genes are used to control the growth of the cells.