若齢ＰＤ－１ノックアウトマウスに誘発される自己免疫性肝炎の研究

PD-1敲除幼鼠诱导自身免疫性肝炎的研究

• 批准号: 21H02717
• 负责人: 石田 靖雅
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02717/
• 关键词: PD-1; 自己免疫; 肝炎; 生理機能; 肝臓; 変異導入; Msh2; ゲノム変異; neoantigen; autoimmunity; ミスマッチ修復; 自己免疫病; 自己-非自己識別; 肉芽腫

ENU は、マウスに投与した場合、精子形成細胞や正常体細胞のゲノムに点突然変異を引き起こす。令和3年度にも、生後２ヶ月の野生型 WT マウスと PD-1 KO マウス（ともに遺伝的背景は C57BL/6）を用意し、ENU の投与（85 mg/kg BW）を（1週間の間隔を空けて）二度行った。その後、ENU 投与マウスの主に肝臓に出現する炎症病変を観察し、リンパ球浸潤の程度や肉芽腫性病変の出現頻度が経時的に変化することを確認した。本研究では、DNA 複製後に働くミスマッチ修復（MMR）経路の遺伝子のうち、Msh2 遺伝子のKO マウスを利用して、PD-1 KO マウスの体細胞への変異導入を加速させた。具体的には、PD-1 & Msh2 のダブルノックアウト（DKO）マウスを作製し、肝臓をはじめとする複数の臓器に出現する自己免疫性の病変を病理学的、あるいは免疫組織化学的手法を用いて解析した。しかし、ENU 投与や Msh2 欠失の場合、マウスのゲノムに導入される変異はランダムであり、個々の体細胞ごとにパターンが異なるため、たとえ狙い通り PD-1 KO マウスに自己免疫病態が誘発されたとしても、その原因となった変異を、その他の無数の変異の中から割り出すことは非常に難しい。この問題点を部分的に克服するために、PD-1 KO マウスの肝臓において、既知の非自己タンパク質を発現させる実験も並行させるが、令和3年度には、その準備を開始した。実験手法としては、マウスの尾静脈から Sleeping Beauty (SB) トランスポゾン（外来遺伝子の発現ベクター）とその transposase (SB100X) 発現ベクターを共注入する HTVi 法を活用する。令和3年度には、マウス MHC クラス I 分子（H-2Kd & H-2Kb）を強制発現させるためのベクターを構築した。

When ENU す and ウスに are placed in the event of た た, the や normal somatic cell of spermatogenic cells suddenly changes を, which leads to す and す す. Make and 3 year に も, 2 ヶ month after の wild-type WT マ ウ ス と PD - 1 KO マ ウ ス (と も に but 伝 background は C57BL / 6) を intention し, emu の cast with (85 mg/kg BW) を の interval between (1 week を empty け て) second line っ た. そ の, emu, cast and after マ ウ ス の main に appear crucial liver に す る inflammatory disease - を 観 し, リ ン パ ball infiltrates の degree や granulomatous disease - frequency の が 経 when に variations change す る こ と を confirm し た. This study で は, DNA replication after に 働 く ミ ス マ ッ チ repair (MMR) 経 road の heritage 伝 son の う ち, traces of Msh2 伝 son の KO マ ウ ス を using し て KO, PD - 1 マ ウ ス の somatic へ の - different import を accelerate さ せ た. Specific に は, PD - 1 & Msh2 の ダ ブ ル ノ ッ ク ア ウ ト (DKO) マ ウ ス を し, liver viscera を は じ め と す る plural の viscera に appear す る oneself immunity の disease - を pathology, あ る い は immunohistochemical technique を with い て parsing し た. し か し, emu, cast with や Msh2 owe の occasions, マ ウ ス の ゲ ノ ム に import さ れ る - different は ラ ン ダ ム で あ り, a 々 の somatic ご と に パ タ ー ン が different な る た め, た と え previously い KO り PD - 1 マ ウ ス に himself immune pathological が 発 lure さ れ た と し て も, そ の reason と な っ た - different を, そ の he の countless の variations in different の か ら り cut out す こ と は very に difficult し い. こ の problem point を part に overcome す る た め に KO, PD - 1 マ ウ ス の is crucial liver に お い て, either know の タ ン パ ク qualitative を 発 now さ せ る be 験 も parallel さ せ る が, make and 3 year に は, そ の preparations begin を し た. Be 験 gimmick と し て は, マ ウ ス の caudal vein か ら Sleeping Beauty (SB) ト ラ ン ス ポ ゾ ン (foreign heritage 伝 son の 発 now ベ ク タ ー) と そ の transposase (SB100X) 発 now ベ ク タ ー を inject す る を HTVi method use す る. Make and 3 year に は, マ ウ ス MHC ク ラ ス I molecules (H - 2 kd & H - 2 KB) を forced 発 now さ せ る た め の ベ ク タ ー を build し た.

项目成果

PD-1 とがん、T 細胞による自己と非自己の識別

PD-1和癌症，T细胞区分自身和非自身

• 发表时间: 2022
• 作者: 相澤 風花;梶本 春奈;森山 大嗣;岡林 亜美;合田 光寛;濱野 裕章;八木 健太;石澤 有紀;座間味 義人;石澤 啓介;山本靖彦;石田靖雅
• 通讯作者: 石田靖雅

PD-1 is required for the suppressiion of inflammatory responses in aged mice

PD-1 是抑制老年小鼠炎症反应所必需的

• 发表时间: 2022
• 作者: Morita Masashi;Toida Ai;Horiuchi Yuki;Watanabe Shiro;Sasahara Masakiyo;Kawaguchi Kosuke;So Takanori;Imanaka Tsuneo;Yoshiro Osaki and Yasumasa Ishida
• 通讯作者: Yoshiro Osaki and Yasumasa Ishida