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ジーントラップ・マイクロアレイによるマウス・ゲノムの網羅的な機能解析

使用基因捕获微阵列对小鼠基因组进行综合功能分析

基本信息

批准号：
14011231
负责人：
石田靖雅
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

マウスのES細胞とレトロウイルス型ジーントラップ・ベクターRET(改良型poly Aトラップ方式を採用)を利用してランダムなジーントラップを行い、約1400のES細胞コロニーをピックアップした。それぞれのES細胞クローンからRNAを抽出し、3'RACE法によりトラップされた遺伝子のcDNA断片を増幅したあと、direct sequencingによってその塩基配列を決定した。現在、その塩基配列の情報に基づき、それぞれの遺伝子に特異的なPCRプライマーを合成し、3'RACE法によって得られたものよりさらに純度の高いcDNA断片を増幅しつつ、microarrayの作製を進めている。これと並行して、トラップされた遺伝子の塩基配列に関する情報を整理・分類することにより、「NAISTrapデータベース」を樹立し、インターネットを通して一般に公開した(http://bsw3.aist-nara.ac.jp/kawaichi/naistrap.html)。外部機関の研究者でも、このデータベースを閲覧することにより、自らが関心を持つ遺伝子がノックアウトされたES細胞クローンが申請者のグループのES細胞ストックの中にあるかどうか検索することが可能になった。申請者のグループは、アカデミック分野からのリクエストには無条件で応じる方針である。さらに、本研究で樹立された多数のES細胞クローンが多能性(pluripotency)を保持し続けていることを証明するため、GABA(C)受容体rho-3サブユニット遺伝子がトラップされたES細胞クローンを一例に用いてノックアウト・マウスの作製を試み、それに成功した。

The ES cells of about 1400 are used in the production of RET(modified poly A). RNA was extracted from ES cells and the cDNA fragments of ES cells were amplified and sequenced by 3'RACE. Now, the information base of gene alignment, the synthesis of specific PCR fragments, the amplification of high-purity cDNA fragments by 3'RACE method, and the production of microarray have been improved. The information related to the base arrangement of the missing information is organized, classified, and set up as NAISTrap. The information is generally open to the public (http://bsw3.aist-nara.ac.jp/kawaichi/nairap.html). External agency researchers are interested in ES cell research, and they may be interested in ES cell research. The applicant's policy is unconditional. In this study, we demonstrated that the pluripotency of most ES cells was maintained and that the GABA(C) receptor rho-3 was successfully used to control ES cells.